Geri Dön

Knock out of GSH2 gene and production of γ-GC in nicotiana benthamiana leaves with Cas9 vector/cell penetrating peptide complex

Cas9 vektörü/hücreye nüfuz eden peptit kompleksi ile nicotiana benthamiana yapraklarinda GSH2 geninin knock out edilmesi ve γ-GC üretimi

PDF İndir

  1. Tez No: 858116
  2. Yazar: OĞUZHAN YAPRAK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. CEYHUN KAYIHAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biyoloji, Genetik, Biotechnology, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Başkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Gama glutamat sistein (γ-GC), terapötik ve besin takviyesi potansiyeli olan bir bileşiktir, ancak mevcut üretim yöntemleri maliyetli ve verimsizdir. Bu tez, Nicotiana benthamiana bitki yapraklarında gen düzenleme teknikleri ile bu bileşiği daha verimli bir şekilde üretmeyi amaçlamaktadır. Bu yenilikçi yöntemin bitki ve sağlık biyoteknolojisi alanında önemli bir parametre olacağına inanılmaktadır. N. benthamiana bitkilerinde γ-GC üretimini artırmak için yeni bir teknik kullanılmıştır. İlk adımda, özel olarak tasarlanmış bir CRISPR/Cas9 vektörü (pKI1.1R) ve KLA-10 hücreye nüfuz eden peptitler (CPP) kullanılmıştır. Tasarlanan gRNA, CPP-pDNA kompleksi oluşturmak için KLA-10 peptidi ile birleştirildi ve CPP-pDNA kompleksi farklı N/P oranlarında N. benthamiana yapraklarına infiltre edildi. Bu aşamada Agrobacterium tabanlı transformasyon yöntemi de kullanılmış ve seçilen yöntemin etkinliği kontrol edilmiştir. Araştırmamızda, N/P:1'in üzerindeki oranların bitki yapraklarında nekroza neden olduğu tespit edilmiştir. Hem Agrobacterium tabanlı bitki transformasyon yönteminde hem de geliştirilen yöntemde glutatyon sentetaz 2 (GSH2) geninde istenen mutasyon tespit edilmiştir. Ancak moleküler analizler tüm sonuçların karışık profilde olduğunu göstermiş ve GSH miktarında önemli bir azalma gözlenmiştir.

Özet (Çeviri)

Gamma glutamate cysteine (γ-GC) is a compound with the potential for therapeutic and nutritional supplements, but current production methods are costly and inefficient. This thesis aims to produce this compound more efficiently by gene editing techniques in Nicotiana benthamiana plant leaves, This innovative method is believed to be an important parameter in the field of plant and health biotechnology. A novel technique was used to increase γ-GC production on N. benthamiana plants. In the first step, a specially designed CRISPR/Cas9 vector (pKI1.1R) and KLA-10 cell penetrating peptides (CPP) were used. The designed gRNA was combined with KLA-10 peptide to form a CPP-pDNA complex and the CPP-pDNA complex was infiltrated into N. benthamiana leaves at different N/P ratios. At this stage, the Agrobacterium-based transformation method was also used, and the efficiency of the selected method was checked. In our research, it was found that ratios above N/P:1 caused a necrosis in plant leaves. In both the Agrobacterium-based plant transformation method and the method developed, the desired mutation in the glutathione synthetase 2 (GSH2) gene was detected. However, molecular analyses showed that all results were mixed profile and a significant decrease in GSH amount was observed.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    724546

    Alzheimer hastalığı nörobiyolojisinde TRPM2 kanalının rolünün fare hipokampus kültüründe moleküler teknikler ile araştırılması

    Investigation of TRPM2 channel on the neurobiology of alzheimer's disease in mouse hippocampus culture by using molecular techniques

    RAMAZAN ÇINAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyofizikSüleyman Demirel Üniversitesi

    Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA NAZIROĞLU

  2. Tez No

    489530

    Dynamic analysis of secretome alterations in a bacilysin-knock out mutant of Bacillus subtilis

    Basilsin biyosentezinin susturulduğu bir Bacillus subtilis mutantında dinamik sekretom değişimlerinin analizi

    ELİF TEKİN İŞLEREL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

  3. Tez No

    520677

    Expression and activity analyses of industrially important extracellular enzymes produced by a bacilysin knock-out mutant of Bacillus subtilis

    Basilisin biyosentezi susturulmuş Bacillus subtilis mutantı tarafından üretilen endüstriyel öneme sahip enzimlerin gen ifadesi ve aktivite analizleri

    SAMET AYTEKİN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    MikrobiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

    DOÇ. DR. SEZER OKAY

  4. Tez No

    648103

    Identification of chemotherapeutic drug resistance mechanisms in human cancer cells using genome scale CRISPR/Cas9 knock-out library

    İnsan kanser hücrelerinde kemoterapötik ilaç direnç mekanizmalarının CRISPR/Cas9 nakavt kütüphanesi kullanarak genom çağında belirlenmesi

    ZEYNEP HAZAL YILMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    BiyomühendislikAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi

    Moleküler ve Translasyonel Biyotıp Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ EMRE DENİZ

  5. Tez No

    406489

    CRISPR/CAS yöntemi ile makak morpheus geninin (NPIPA1) knock-out edilmesi

    Making knock-out of macaque morpheus gene (NPIPA1) using CRISPR/CAS method

    KÜBRA PASPAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    GenetikUludağ Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. ELİF UZ

Geri Dön