Yaşa bağlı makula dejenerasyonunda sirküle mikroRNA'larınpotansiyel biyobelirteç olarak tanımlanması ve adaybiyobelirteç olarak Hsa-mir-626'nın yolak araştırması
Identification of circulating microRNAs as biomarkers in amdand investigation pathway analysis of Hsa-mir-626 as a potentialbiomarker
- Tez No: 858083
- Danışmanlar: PROF. DR. NEHİR ÖZDEMİR ÖZGENTÜRK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Biyobelirteç, mir-626, mTOR, SLC7A5, YBMD, AMD, biomarker, mir-626, mTOR, SLC7A5
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), genetik ve çevresel faktörlerin etkileşimiyle ilişkilendirilen çok faktörlü bir hastalıktır. YBMD 'nin erken evresi, retina pigment epitel (RPE) hücrelerinin işlev bozukluğu, pigment değişiklikleri ve drusen birikimi ile birlikte ile karakterizedir. Son çalışmalar, mikroRNA'ların (miRNA) YBMD patolojisinde ilişkili olduğunu göstermektedir. miRNA'nın gen ifadesinin düzenlenmesi gibi epigenetik mekanizmaların YBMD ile ilgili olduğunu ve miRNA'ların potansiyel terapötik hedefler olabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, RPE hücrelerinde miRNA aracılı transkripsiyon yeterince araştırılmamış olup, düzensiz miRNA'lar, hücredeki miRNA seviyelerini modüle etmek için miRNA mimikleri veya antagomirlerin kullanımıda diğer bir tedavi seçeneği olabilir. Bu çalışmada, YBMD'li hastalarda miRNA ekspresyon profili incelendi ve aday hsa-mir- 626'nın YBMD'nun moleküler pataogenizinde ve insan retina pigment epitel hücre hattı olan ARPE19 hücrelerinde solute carrier family seven-member 5 (SLC7A5) genini hedefleyerek retina pigment epitel hücrelerinde mammalian target of rapamycin (mTOR) aktivite yollarını ve yola bağlı genleri nasıl inhibe ettiği araştırıldı. Çalışmamızda, 50 yaş üstü, YBMD hastalarından (n=70) ve bir kontrol grubundan (n=50) serum toplandı ve serumdan elde edilen eksozomlardan miRNA izolasyonu yapıldı. Kontrol ve YBMD örneklerinde, 175 genin ekspresyon seviyesine bakıldı. in silico analizler yapılarak belirlenen potansiyel biyobelirteç hsa-mir-626 için, ARPE19 hücrelerine, mir-626 mimik, mir-626 inhibitörü ve small interference RNA (siRNA) 'yı transfekte edilerek, qRT-PCR ve western blot yapıldı. qRT-PZR ile mTOR, Akt1, caspas 3, Bax, SLC17A7, SLC17A8, Creb1, Pten, HIF1A, HIF2A' nin gen ekspresyon seviyesine bakıldı. Bu çalışmamız ile mir-486-5p, miR-626, miR-583, miR-484, miR-202-5p, miR-595 ve miR- 635'in gen ekspresyon seviyelerinin arttığı, miR-885-5p, miR-129-3p, miR-132-3p, miR-873- 5p, miR-489-3p, miR-632, miR-342-3p ve miR-139-5 gen ekspresyon seviyelerinin ise düştüğü belirlendi. Biyoinformatik analizler sonucunda, mir-626'nın SLC7A5 genleriyle ilişkili olduğu belirlendi. İn vitro çalışmalar, hsa-mir-626'nın SLC7A5 gen ekspresyonunu baskıladığı ve mTOR sinyal yolunu inhibe ettiğini gösterdi. Hsa-mir-626, mTOR sinyal yolağı üzerinden SLC7A5 genini hedef alarak RPE hücrelerinde dejenerasyona neden olmaktadır. Bu, YBMD'nin moleküler patogenezinde önemli bir rol oynar ve güçlü bir biyobelirteç olabilir.
Özet (Çeviri)
Age-related macula degeneration (AMD) is a multifactorial disease associated with the complex interaction of genetic and environmental factors. Recent studies have shown that miRNAs are associated with the pathological process involved in age-related macula degeneration (AMD). However, the microRNA-mediated post-transcriptional regulation in RPE cells remains insufficiently explored. Dysregulated miRNAs could serve as another therapeutic option by modulating miRNA levels in cell using miRNA mimics or antagomirs. Our study investigated miRNA expression profiles in AMD patients, focusing on hsa-mir- 626's role in AMD pathogenesis by targeting the SLC7A5 gene and inhibiting mTOR pathways in RPE cells. Serum samples were collected from patients with AMD (n=70) and a control group (n = 50), who over the age of 50. For the analysis of the miRNA profile involved in circulating miRNA was isolated from exosomes obtained from the serum. In the control and AMD samples 175 genes associated with neovascularization and apoptosis using the PCR array method. After in silico analysis identified potential biomarker and target gene. We transfected mir-626 mimic, mir-626 inhibitor and siRNA in RPE cell line for knocked down mir-626 levels and overexpression by mir-626-siRNA that assessed the role of SLC7A5 on RPE cell proliferation. We additionally measured the expression of mTOR, Akt1, caspase 3, Bax, SLC17A7, SLC17A8, Creb1, Pten, HIF1A, HIF2A. Our result showed that the expression levels of mir-486-5p, miR-626, miR-583, miR-484, miR- 202-5p, miR-595, and miR-635 were upregulated, while the expression levels of miR-885-5p, miR-129-3p, miR-132-3p, miR-873-5p, miR-489-3p, miR-632, miR-342-3p, and miR-139-5p were downregulated. The findings demonstrate that mir-626 suppressed SLC7A5 gene expression and proliferation of ARPE-19 cells through the mTOR signaling pathway, leading to degeneration. We identified how miR-626 causes apoptosis and macula degeneration in RPE cells by targeting SLC7A5 through the mTOR signaling pathway. Importantly, we identify miR-626 as a potential biomarker crucial for understanding AMD's molecular pathogenesis.
Benzer Tezler
- Yaşa bağlı maküla dejenerasyonunda risk faktörlerinin incelenmesi
Risk factors in age-related macular degeneration
FAİK SAĞLAM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2002
Göz HastalıklarıSüleyman Demirel ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. YAVUZ BARDAK
- Yaşa bağlı maküla dejenerasyonunda risk faktörleri
Başlık çevirisi yok
HİMMET TEKİN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2002
Göz HastalıklarıSelçuk ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SÜLEYMAN OKUDAN
- Yaşa bağlı makula dejenerasyonunda koroidal neovaskülarizasyonun verteporfinle fotodinamik tedavisi
Photodynamic therapy of choroidal neovascularization in age-related macular degeneration with verteporfin
MELTEM ŞORABATUR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2006
Göz HastalıklarıEskişehir Osmangazi ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SEYHAN TOPBAŞ
- Yaşa bağlı makula dejenerasyonunda orta ve uzun dönem fotodinamik tedavi sonuçlarımız
Medium and long term results of photodynamic therapy with verteporfin in subfoveal choroidal neovascularization due to age related macular degeneration
FADİME KENDİR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2007
Göz HastalıklarıSüleyman Demirel ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. YAVUZ BARDAK
- Yaşa bağlı makula dejenerasyonunda bevacizumab ve fotodinamik tedaviyle kombine bevacizumab tedavisinin etkinlik ve güvenilirliğinin araştırılması
Bevacizumab combined with vertoporfirin photodynamic therapy and intravitreal bevacizumab in neovascular age related macular degeneration
EMEK ER MÜDÜROĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2008
Göz HastalıklarıEskişehir Osmangazi ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEYHAN TOPBAŞ