Application of CRISPR /DCAS9 systems for increasing theexpression of FSH receptor in human granulosa cells
Insan granüloza hücrelerinde FSH reseptörünün ekspresyonunu arttırmak için CRISPR /DCAS-9 sistemlerinin uygulanmasi
- Tez No: 752506
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ SERÇİN KARAHÜSEYİNOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Folikül, FSHR, Granüloza Hücresi, CRISPR/dcas9, CRISPR, Folikül uyarıcı hormon, Gen ifadesi, Granüloza hücreleri, Reseptörler-FSH, Follicle, FSHR, Granulosa Cells, CRISPR/dcas9, CRISPR, Follicle stimulating hormone, Gene expression, Receptors-FSH
- Yıl: 2022
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Koç Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Üroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
FSH, ovaryumda folikülogenezin desteklenmesi ve steroid hormonlarının üretimi için gereklidir. FSH'nın eksikliğinde foliküler gelişim durur. Granüloza hücrelerinde FSH' dan bağımsız büyümeden FSH' ya bağımlı büyümeye geçiş FSH reseptörünün (FSHR) bu hücrelerdeki anlatımına bağlıdır. CRISPR aktivasyonu, endonükleaz görevi bulunmayan bir CRISPR protein varyantı olan dCas9' un DNA'yı değiştirmeden genlere bağlanma yeteneğine dayanır. CRISPR aktivasyon (CRISPRa) sistemleri DNA' ya bağlanır ve gen anlatımını geliştirmek için transkripsiyon faktörlerini kullanır. CRISPRa stratejileri, füzyon proteinleri ve Cas sisteminin yeniden mühendisliği dahil olmak üzere çeşitli transkripsiyonel aktivatörleri kullanır. SunTag, SAM ve VPR' nin tümü, ilk dCas9- VP64 tekniğine göre önemli gelişmeler göstermiştir; bu nedenle, çeşitli hücrelerdeki genleri aktive ederken seçilebilecek birkaç seçenek vardır. Araştırmamızın ana hedefi, insan granüloza hücre hattında (HGRC) FSH reseptörünin anlatımını artırmak için CRISPR dcas9 teknolojisinin kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek ve bu uygulamanın hücre içi yolaklardaki olası etkilerini incelemektir. dCas9 sisteminin FSHR' yi aktive edebildiğini ve artan FSH reseptör aktivitesinin steroidojenik, yaşamı sürdürme ve ölüm sinyalizasyonunda yer alan birkaç alt yolu etkilediği sonucuna ulaşılmıştır. İnsan granüloza hücrelerinde FSHR' yi etkinleştirmek için dcas9 sistemini kullandıktan sonra, FSHR, AKT, aromataz, MAPK8, MAPK1, ESR1, MTOR, p53, kaspaz 3' ün gen anlatımını önemli ölçüde arttığını gösterdik. vii FSHR ile ilgili proteinler incelendiğinde FSHR, AKT, aromataz ve p-38 MAPK' da protein seviyesinin yükseldiği de gözlendi. dcas9 ile aktive edilen FSHR' nin işlevselliği, follitropin alfa (Gonal-f) tedavisi kullanılarak test edildi. FSHR, AKT, aromataz, MAPK8, p53 ve kaspaz 3' ün gen anlatım seviyesinin bütün zamanlara bağlı olarak artması gösterilmişken, ESR1 ve MTOR' un gen anlatımının geçici olarak arttığı gösterilmiştir. Araştırmamızda, dcas9 teknolojisinin gen ve protein seviyelerinde FSHR' yi etkili bir şekilde artırmak için kullanılabileceği ortaya konmuştur. Genom düzenleme teknikleri kullanılarak arttırılmış FSH reseptörü, in-vitro oosit maturasyonunda, kadınlarda sık görülen FSH duyarlılığı sorunlarının araştırılmasında özellikle, polikistik over sendromu (PCOS), overin aşırı ve yetersiz duyarlılığı, kanser hastalarındaki çalışmalarda yardımcı olabilir.
Özet (Çeviri)
FSH (follicle-stimulating hormone) is necessary for the ovary to produce oocytes and the production of steroid hormones. Follicular development is arrested when FSH is not present. The change from FSH-independent to FSH-dependent growth in granulosa cells depends on FSHR (follicle-stimulating hormone receptor). CRISPR activation (CRISPRa) is based on the ability of dCas9, a CRISPR protein variant that cannot act as an endonuclease, to connect to genes without altering the DNA. CRISPRa systems bind to DNA and recruit transcription factors to enhance gene expression. CRISPRa strategies use a variety of transcriptional activators, including fusion proteins and Cas system re engineering. SunTag, SAM, and VPR have all shown significant improvements over the initial dCas9-VP64 technique; therefore, there are several options to choose from when activating genes in various cell lines. The objective of this research has been established to determine if CRISPR dcas9 technology could be used to increase FSH receptor expression in HGRC1 cells (human granulosa cell line) and to investigate the possible effects of dCas9 application on intracellular pathways . The results have indicated that, the dcas9 system can activate FSHR, and increased FSH receptor activity affects several fundamental cellular events involving steroidogenic, life-sustaining, and cell death related signalling sub-pathways. After using the dcas9 system to activate FSHR in human granulosa cells, we have demonstrated a significant increase in the gene expression profile of FSHR, AKT, aromatase, MAPK8, MAPK1, ESR1, MTOR, p53, caspase 3. The examination of FSHR related proteins has revealed that the protein levels of FSHR, AKT, aromatase, and p-38 MAPK have also increased. v The functionality of dcas9 activated FSHR was tested using follitropin alpha (Gonal-f). It has also been shown that although the gene expression levels of FSHR, AKT, aromatase, MAPK8, p53, and caspase 3 increased on a time-dependent manner, the increment in MAPK1, ESR1 (Estrogen Receptor1) and MTOR was temporary. The results of our research led us to conclude that dcas9 technology can be used to increase FSHR at the gene and protein levels efficiently. Genetically engineered granulosa cell for increased FSHR can be used as in vitro models to investigate in vitro maturation (IVM), FSH hyper/hyposensitivity, polycystic ovary syndrome (PCOS) and cancer studies.
Benzer Tezler
- İzmir'de bazı yolların kapatılarak yaya bölgeleri oluşturma da kent peyzajını geliştirme açısından yeniden planlanması üzerinde araştırmalar
Başlık çevirisi yok
BAHAR TÜRKYILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Şehircilik ve Bölge PlanlamaEge ÜniversitesiŞehir ve Bölge Planlama Ana Bilim Dalı
- Ovulasyon indüksiyonu tedavisinde folliküler gelişimin ultrasonografik takibi
Başlık çevirisi yok
MERİH BAYRAM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1987
Kadın Hastalıkları ve DoğumGazi ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MÜLAZIM YILDIRIM
- Çoklu amaçların çözümlemesinde amaç programlaması ile genelleştirilmiş ters yaklaşımı ve yem sanayiinde bir uygulama
Goal programming and generalieed inverse approaches in the multi-objective analysis and application in feed industry
HASAN BAL
- Bölünüme bağlı olmayan varyans çözümlemesi çoklu karşılaştırmalar ve tarımda uygulamaları
Distiribution-free analyis of variance multiple comparisons and applications in agriculture
HAMZA GAMGAM