Geri Dön

İnsan β-defensin-2 proteininin Pichia pastoris'te rekombinant üretimi

Recombinant production of human β-defensin-2 protein in Pichia pastoris

PDF İndir

  1. Tez No: 747221
  2. Yazar: ŞEYMANUR ÇOBANOĞLU
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYŞENUR YAZICI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biotechnology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Antimikrobiyal peptidler, DNA-rekombinant, Pichia pastoris, Rekombinant DNA teknolojisi, Antimicrobial peptides, DNA-recombinant, Pichia pastoris, Recombinant DNA technology
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erzurum Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Antimikrobiyal peptitler (AMP) 6-100 aminoasit içeren ve canlılar tarafından üretilebilen genelde katyonik, hidrofobik, lizin ve arjinin aminoasitleri açısından zengin olan kısa peptidlerdir. İnsan beta defensin-2 (hBD-2), düşük molekül ağırlıklı, sistein açısından zengin katyonik özellik içeren, epitel hücrelerinde enfeksiyon durumunda üretimi artan antimikrobiyal bir peptidtir. Pichia pastoris ökaryotik protein üretimi için kullanılabilen yüksek ifade, indüklenebilirlik, ökaryotlara yakın glikolizasyon mekanizması gibi avantajlara sahip ekspresyon sistemidir. Bu tez çalışmasında, FaDu (ATCC® HTB-43™) hücre hattı Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) bakterileri ile indüklenmiş ve RNA izolasyonu yapılmıştır. Bu RNA'lardan cDNA sentezi yapılmış ve özgün primerler kullanılarak hBD-2 polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılmıştır. Elde edilen hBD-2'nin önce pGEM-T easy vektörüne alt klonlaması yapılmıştır. Ardından pPICZαA vektörüne klonlaması yapılarak elektroporasyon yöntemi ile P. pastoris X-33 hücrelerine transforme edilmiştir. hBD-2 peptidinin, elde edilen rekombinant P. pastoris'te AOX promotörü kontrolünde 30 ℃'de 96 saat boyunca üretimi agar difüzyon testi, qRT-PCR, SDS-PAGE ve western blotlama yöntemleri kullanılarak izlenmiştir. Sonuçta, hBD-2 peptidinin 30 ℃, 150 rpm'de ve %2 metanol indüklemesi ile 96 saatte üretiminin gerçekleştiği tespit edilmiştir. Elde edilen fonksiyonel özelliklerini koruyan hBD-2 peptidi terapötik amaçlar için kullanılabilir.

Özet (Çeviri)

Antimicrobial peptides (AMP) are short peptides containing 6-100 amino acids. It can be produced by living organisms, generally rich in cationic, hydrophobic, lysine and arginine amino acids. Human beta defensin-2 (hBD-2) is an antimicrobial peptide with low molecular weight, containing cysteine-rich cationic properties, and whose production is increased in case of infection in epithelial cells. Pichia pastoris is an expression system that can be used for eukaryotic protein production with advantages such as high expression, inducibility, and glycosylation mechanism close to eukaryotes. In this study, FaDu (ATCC® HTB-43™) cell line was induced by Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) and RNA was isolated. cDNA was synthesized from these RNAs and hBD-2 was amplified with polymerase chain reaction using unique primers. The resulting hBD-2 was first subcloned into the pGEM-T easy vector. Then, it was cloned into the pPICZαA vector and transformed into P. pastoris X-33 cells by electroporation. Production of hBD-2 peptide in the obtained recombinant P. pastoris under the control of AOX promoter for 96 hours at 30 °C was monitored using agar diffusion test, qRT-PCR, SDS-PAGE and western blotting methods. As a result, it was determined that the hBD-2 peptide was produced at 30 ℃, 150 rpm and 96 hours with the induction of 2% methanol. The resulting functional active hBD-2 peptide can be used for therapeutic purposes.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    799619

    Sistemik retinoik asit kullanımının dişeti antimikrobiyal savunma mekanizmaları üzerine etkisi

    The effect of systemic retinoic acid use on periodontal antimicrobial defense mechanism

    SAADET NUR ATALAY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Diş Hekimliğiİstanbul Medipol Üniversitesi

    Periodontoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NUR BALCI

  2. Tez No

    846274

    The role of oxidative stress factors in the pathophysiology of Ocular Rosacea, analysis of tears and other materials

    Oküler Rosacea patofizyolojisinde oksidatif stres faktörlerinin rolü, gözyaşı ve diğer materyallerin analizi

    NİLÜFER YEŞİLIRMAK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyokimyaGazi Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NESLİHAN BUKAN

    PROF. DR. JEAN-LOUIS BOURGES

  3. Tez No

    158014

    İnsan meme kanserlerinde β-catenin stabilitesi, frizzled ve cyclin-D1 proteinlerinin ekspresyonu ve prognoz ile ilişkisi

    β-catenin stability, frizzled and cyclin D1 proteins expression in human breast cancer and its relation with their prognosis

    BAHA ZENGEL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    OnkolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERAL SAKIZLI

  4. Tez No

    447473

    İnsan karaciğer hücre hattında (hepg2) tgf-β/ smad yolağının araştırılması

    Human liver cells in line (hepg2), tgf-β / smadinvestigation of the pathway

    İLKER GÜVEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyokimyaErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL

  5. Tez No

    537602

    İnsan gen terapötiklerinden interferon beta (hIFNβ)'nın Tetrahymena thermophila'da rekombinant üretimi ve karakterizasyonu

    Recombinant production and characterisation of human interferon beta (hIFNβ) therapeutic protein in Tetrahymena thermophila

    MURAT KAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyomühendislikAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

Geri Dön