The effects of Helicoverpa armigera single nucleopolyhedrovirus origin of chitinase and catepsin proteins on virulance of Chilo iridescent virus
Helicoverpa armigera single nükleopolihedrovirüs orjinli kitinaz ve katepsin proteinlerinin Chilo iridescent virüs'ün virülansına etkileri
- Tez No: 729952
- Danışmanlar: PROF. DR. ZİHNİ DEMİRBAĞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Chilo iridescent virüs (CIV) tarımda zararlı bazı böcekleri enfekte ettiği için ekonomik ve ekolojik olarak özel bir öneme sahiptir. Fakat, CIV enfekte ettiği konaklarda düşük virülans oluşturmaktadır. Bu durumun nedenleri arasında birçok böcek virüsünün sahip olduğu ancak CIV'de olmayan kitinaz ve katepsin genlerinin bulunmaması gösterilebilir. Bakülovirüslerde bulunan kitinaz, virüs replikasyonunun geç fazında katepsin ile birlikte ifade edilir. Katepsinin peritrofik membranın yapısını bozarak, kitinazın ise kitin tabakasını tahrip ederek böcek üzerinde etkili olduğu bilinmektedir. Bu bilgiler ışığında, bu çalışmada bakülovirüslere ait kitinaz ve katepsin proteinleri kullanılarak CIV'nin virülansının arttırılabilmesi hedeflenmiştir. Bu doğrultuda, ilk önce kitinaz ve katepsin proteinlerinin bakteriyal ifade sisteminde üretilmeleri ve elde edilen proteinlerin böceğe yedirildikten sonra CIV virülansına etkilerinin araştırılması hedeflenmektedir. Bakülovirüs genomundan kitinaz ve katepsin genleri uygun primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonuyla (PCR) çoğaltıldı. Çoğaltılan genler pJET1.2 vektörüne klonlandı. Gerekli doğrulamalar yapıldıktan sonra, her iki gen ayrı ayrı pET28a+ ifade vektörüne aktarılarak Escherichia coli BL21(DE3) hücresinde ifadeleri sağlandı. Kitinaz (64 kDa) ve katepsin (43 kDa) proteinleri SDS-PAGE ve western blot analiz yöntemleriyle belirlendikten sonra, nikel afinite kromatografisi ile saflaştırıldılar. Elde edilen proteinlerden 500 ng, 1000 ng, 1500 ng, 2000 ng, 2500 ng, 5000 ng konsantrasyonlarında Galleria mellonella larvalarına yedirildikten sonra CIV ile enfekte edildiler. Bu çalışma neticesinde, bakülovirüse ait kitinaz ve katepsin proteinlerinin CIV'nin virülansını % 23 arttırdığı tespit edildi. Buna göre bakulovirüs kitinaz ve katepsin proteinlerinin CIV'nin virülansını artırmak amacıyla kullanılabileceği belirlendi.
Özet (Çeviri)
Chilo iridescent virus (CIV) is of particular economic and ecological importance as it infects some pests in agriculture. However, it causes low virulence in CIV-infected hosts. Accordingly, it was determined that baculovirus chitinase and cathepsin proteins could be used to increase the virulence of CIV. Chitinase in baculoviruses is expressed together with cathepsin in the late phase of virus replication. It is known that cathepsin is effective on the insect by destroying the structure of the peritrophic membrane, and chitinase is effective on the insect by destroying the chitin layer. In the light of this information, in this study, it was aimed to increase the virulence of CIV by using chitinase and cathepsin proteins belonging to baculoviruses. Accordingly, it is primarily aimed to produce chitinase and cathepsin proteins in the bacterial expression system and to investigate the effects of the obtained proteins on CIV virulence after ingestion of the insect. Chitinase and cathepsin genes from the baculovirus genome were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using appropriate primers. The amplified genes were cloned into the pJET1.2 vector. After the necessary validations were made, both genes were transferred separately into the pET28a+ expression vector to ensure their expression in Escherichia coli BL21(DE3) cell. After the chitinase (64 kDa) and cathepsin (43 kDa) proteins were determined by SDS-PAGE and western blot analysis methods, they were purified by nickel affinity chromatography. They were infected with CIV after feeding to Galleria mellonella larvae at concentration of 500 ng, 1000 ng, 1500 ng, 2000 ng, 2500 ng, 5000 ng from the obtained proteins. As a result of this study, it was determined that the chitinase and cathepsin proteins of baculovirus increased the virulence of CIV by 23%. Accordingly, it was determined that baculovirus chitinase and cathepsin proteins could be used to increase the virulence of CIV.
Benzer Tezler
- Devrelerin büyük işaret cevaplarının bilgisayar yardımıyla bulunması
Başlık çevirisi yok
NÜKHET GÜNEYİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiUludağ ÜniversitesiElektrik-Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERGÜR TÜTÜNCÜOĞLU
- Ulaş Sağlık Ocağı merkezinde nüfusun bazı niteliklerine ve konutların durumuna ilişkin bir çalışma
An Investigation carried out at the Ulaş Public Health Centre concerning some characteristics of the population and housing conditions in the district of Ulaş
EROL ŞANLI
Doktora
Türkçe
1985
Halk SağlığıCumhuriyet ÜniversitesiHalk Sağlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SERVET ÖZGÜR
- Çimentonun sertleşmesi üzerinde kimyasal komponentlerin etkisi
Başlık çevirisi yok
NACİYE TÜRKEL
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Kimya MühendisliğiUludağ ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA CEBE
- 1981 Türkiye tarımsal yapısının önemli bileşenleri ve tarımsal bölgelerin elde edilmesi
Principle components of Turkey's agricultural structure and to determine agricultural rigions in 1981
İHSAN KARABULUT
- Buğdayda farklı melezleme teknikleri kullanarak tohum tutma oranının saptanılması
Başlık çevirisi yok
İSMAİL TÜZÜN
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
ZiraatUludağ ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALİS RUHİ EKİNGEN