Cloning of beta hemolysin gene from coagulase-negative staphylococci and testing of biological activity
Koagulaz negatif stafilokoklardan beta hemolizin geninin klonlanması ve biyolojik aktivitesinin gösterilmesi
- Tez No: 667904
- Danışmanlar: PROF. DR. GAMZE BAŞBÜLBÜL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoteknoloji, Microbiology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Gen klonlama, Moleküler klonlama, Gene cloning, Molecular cloning
- Yıl: 2021
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Koagülaz negatif stafilokoklar (KNS) serbest plazma koagülaz üretememelerinden dolayı yakından ilişkili oldukları fakat onlardan daha virulent olan S. aureus'dan ayrılmaktadırlar. KNS'lar, damar içi araç enfeksiyonlarından kaynaklanan en yaygın bakteriyemi sebebidir. Günümüzde önemli türler olan S. epidermidis ve S. haemolyticus klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında hastane kaynaklı ana patojenleri temsil etmektedirler. Beta Hemolizin (hlb), S. epidermidis'in patogeneziyle ilişkili önemli bir virülans molekülü olarak hizmet etmektedir. Bu sitotoksin iki ayrı aksiyon mekanizmasına sahiptir. Bunlar: sfingomiyelinaz aktivitesi ve DNA biyofilm ligaz aktivitesi yani β-toksinin eksogenoz DNA varlığında kendisini çapraz bağlama yeteneğidir. Bu çalışmada, Beta Hemolizin (hlb) proteinin aktivitesini ele almak için diyabetik ayak enfeksiyonlarından (DFI) alınan örneklerden S. epidermidis suşları kullanılmıştır. hlb genini çoğaltmak için KpnI ve EcoRI restriksiyon bölgeleri eklenmiş modifiye primerler dizayn edilmiştir. Çoğaltılmış gen vektör olarak pUC19 plazmidi kullanılarak klonlanmış ve sekans analizine gönderilmiştir. Sekans sonuçlarına göre klonlandığımız gen, (Staphylococcus epidermidis strain Q47 sphingomyeline phosphodiesterase) genine 98.95% benzerlik göstermiştir. Kanlı agarda hemoliz testi yapılarak rekombinant protein varlığı doğrulanmıştır.
Özet (Çeviri)
Coagulase-negative staphylococci (CoNS) are differentiated from the closely related but more virulent Staphylococcus aureus by their inability to produce free plasma coagulase. Coagulase-negative staphylococci are common etiologies of bacteremia that are resulted from intravascular device infections. They now represent one of the major nosocomial pathogens in clinical microbiology laboratories with S. epidermidis and S. haemolyticus being the significant species. Beta hemolysin (hlb) serves as an important virulence molecule involved in the pathogenesis of S. epidermidis. This cytotoxin has two distinct mechanisms of action; Sphingomyelinase activity and DNA bio-film ligase activity (i.e. the ability of β-toxin to cross-link itself in the presence of exogenous DNA). In this study, strains of S. epidermidis cultured from foot infections from diabetic patients were used. Primers with attached KpnI and EcoRI restriction sites were designed to amplify the hlb gene. The gene was subjected to cloning using pUC19 plasmid as a vector. After cloning, the amplicon obtained by M13 PCR was sent for confirmation by sequencing. From the sequence result, a percentage similarity rate of 98.95% of (Staphylococcus epidermidis strain Q47 sphingomyeline phosphodiesterase) was confirmed as expected. The recombinant protein was tested on a sheep blood agar which showed hemolysis of erythrocytes.
Benzer Tezler
- Dört zamanlı türbaşarj direk püskürtmeli bir dizel motorunun bilgisayar ile sümülasyonu
Computer aided simulation of a fourstroke turbocharged direct-anjection diesel engine
MUSTAFA BALCI
- John Fowles as a postmodernist: An analysis of Fowles's fiction within metafictional theories
Başlık çevirisi yok
SERPİL OPPERMANN TUNÇ
Doktora
İngilizce
1987
İngiliz Dili ve EdebiyatıHacettepe Üniversitesiİngiliz Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. OYA BATUM
- Relationships within the families in D.H. Lawrence's Sons and Lovers, The Rainbow, Women in Love
Başlık çevirisi yok
ZERRİN EREN
- Büyük güçlü devre kesicilerin yapı ve problemleri
Başlık çevirisi yok
LEVENT YILDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
1988
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiMarmara ÜniversitesiElektrik-Elektronik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NESRİN TARKAN
- Gen transferinden hayvancılıkta yararlanma yolları
The Ways of using the gene transfer in animal breeding
SAİM BOZTEPE