Titrek kavak (Populus tremula) bitki doku kültürlerinin kurulması ve lignin biyosentezi ile ilgili genlerin transformasyonu çalışmaları
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 66265
- Danışmanlar: PROF. DR. NERMİN GÖZÜKIRMIZI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Doku kültürü, Dönüşüm, Genler, Kavak ağacı, Tissue culture, Transformation, Genes, Populus
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
V. TÜRKÇE ve İNGİLİZCE ÖZETLER V. 1. ÖZET Bu çalışmada, Populus tremuld ya ait Türkiye orijinli 6 klonun doku kültürü sistemi kuruldu. Gövde rejenerasyonu için, internod, yaprak, gövde ve kök eksplantlan WPMZ, ACM-2 ve MSS gibi farklı besiyerlerinde test edildi. Tüm klonlar için, en iyi gövde rejenerasyonu, internodlar kullanılarak WPMZ besiyerinde sağlandı. Kök rejenerasyonu için ise, rejenere olan gövdeler WPMB, WPM2B ve 1/4WPM besiyerlerine aktarıldılar ve en iyi kök oluşumu WPMB besiyerinde elde edildi. Bitkicikler 3/4 humus ve 1/4 kum içeren toprağa % 90-100 oranında adaptasyon gösterdiler. Populus tremuldma transformasyonu, NOS promotörü, NPT II geni ve 35S promotorünün, yanısıra antisens konumda pOMT8 genini içeren pGA643 plazmidini taşıyan Agrobacterium tumefaciens Agl-1 susu kullanılarak yapıldı. Styloscmthes humilis' den izole edilen pOMT8 geni kavak bitkisindeki OMT geni ile % 83 oranında homoloji göstermesi nedeniyle transformasyonda kullanıldı. Gövde eksplantlarının Agrobacterium tumefaciens ile ko-kültivasyonundan sonra rejenerasyon frekansı % 62 olarak belirlendi ve eksplant başına 5-6 gövdecik elde edildi. Transformasyon DNA ve RNA düzeyinde; PCR, Southern blot ve Northern blot, protein düzeyinde ise SDS poliakrilamid jel elektroforez ve nativ jel elektroforez yöntemleri ile belirlendi. Transgenik bitkilerdeki OMT aktivitesi kontol bitkilere oranla % 30-39 oranında azalma gösterirken, peroksidaz aktivitesi transgenik bitkilerde kontrollere oranla bir kat arttı. 61Antisens konumda pOMT8 genini taşıyan transgenik kavak bitkilerinde total lignin miktarı değişmedi. Lignin bileşenlerinde ise kontrol bitkilere oranla önemli ölçüde değişiklikler olduğu saptandı; syringyl ünitelerinde azalma, guaiacyl ünitelerinde ise artma olduğu gözlendi. Kstolrimyasal analizler sonucunda transgenik bitkilerde hücre duvarında kırmızı-kahverengi renk oluşumu gözlenirken, kontrol bitkilerde pembe renk oluştumu gözlendi. Bulgularımız, Popuİus tremuîd nın genomuna heterolog pOMT8'in transformasyonu ile endojen OMT aktivitesinde azalma, peroksidaz aktivitesinde yükselme ve lignin bileşenlerinde de değişiklikler olabileceğini göstermektedir. Bu sonuçlar kağıt endüstrisinde iyi nitelikli kağıt hammadesi elde etmek amacıyla kullanılabilir. 62
Özet (Çeviri)
V. 2. SUMMARY Establishment of Plant Tissue Culture of Poplar (Populus tremula) and Transformation with Genes Involved in Lignin Biosynthesis In this study tissue culture system of Populus tremula, 6 clone originated from Turkey have been established. For shoot regeneration intemodes, leaf, bud and root explants on different media WPMZ, ACM-2 and MSS have been tested. The best shoot regeneration was obtained on WPMZ with intemodes for all clones. For root regeneration shoots were transferred to WPMB, WPM2B and 1/4WPM media. The best root formation was obtained on WPMB. Adaptation of plantlets to soil condition (3/4 humus and 1/4 sand) was between 90- 100%. Transformation of Populus tremula have been performed using Agrobacterium tumefaciens, Agl-1 strain, carrying pGA643 plasmide with antisense pOMT8 gene under the 35S promoter and NPT n gene under NOS promoter. pOMT gene from Stylosanihes humilis shows 83 % homology with OMT from poplar that we use this heterologous constract for transformation of poplar. After co-cultivation of stem explants with Agrobacterium tumefaciens regeneration efficiency was 62 % and 5-6 shoots have been obtained per stem explant. Transgenic plants were confirmed on DNA and RNA level using PCR, Southern blot and Nourhern blot; on protein level using SDS-PAGE and native gel electroforesis. While OMT activity in transgenic plants was for 30-39 % reduced in comparation to controls, peroxidase activity was one fold higher in transgenic plants compared with controls. 63In transgenic poplar plants carrying antisense pOMT8 gene total lignin amount was not changed, but lignin composition was significantly modified; syringyl units were decreased and guaiacyl units were increased in transgenic plants compared with controls. In histochemical analysis of transgenic plants cells wall was red-brown, but in controls it was pink in color. Results showed that it is possible to down regulate endogenous OMT activity, increase peroxidase activity and change lignin composition through the introduction of heterologous pOMT8 gene in poplar. The results obtained here could be usefiil for utilization of poplar in paper and pulp industry. 64
Benzer Tezler
- Populus tremula (Titrek kavak) doku kültürlerine peroksidaz genlerinin agrobacterium tumefaciens aracılığı ile aktarılması
Başlık çevirisi yok
K.ZELİHA İPEKÇİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Biyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NERMİN GÖZÜKIRMIZI
- Titrek kavak (Populus tremula L. )ve Kafkas ıhlamuru (Tilia rubra DC.)'nun doku kültürü teknikleri ile üretilmesi
Propagation of european aspen (Populus tremula L.) and Caucasian linden (Tilia rubra DC.) using by tissue culture technigues
ALİ ÖMER ÜÇLER
Doktora
Türkçe
1994
Ormancılık ve Orman MühendisliğiKaradeniz Teknik ÜniversitesiOrman Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ZEKİ YAHYAOĞLU
- Titrek kavak (populus tremula L.) ve kağıt sanayi
Suitability of trembling aspen (Populus tremula L.) for pulp and paper industry
CELİL ATİK
Yüksek Lisans
Türkçe
1995
Ormancılık ve Orman Mühendisliğiİstanbul ÜniversitesiOrman Endüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EROL GÖKSEL
- Titrek Kavak ( Populus termula L.)'ın sürgün ve köklerinde pigmentasyon ve inhibitör ilişkilerinin araştırılması
İnvestigations on pigmentation and inhibitory relationships in shoots and roots of p. tremula L.
AYSEL KAYA