Klonlama ile transgenik koyun üretiminde donör hücrelerin nanopartiküller kullanılarak transfeksiyonu, Roscovitine ve Trichostati-A ile yeniden programlanması
Transfection of donor cells using nanoparticles and reprogramming with Roscovitine and Trichostatin A for the production of transgenic sheep by cloning
- Tez No: 659435
- Danışmanlar: PROF. DR. SERHAT PABUCCUOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Veteriner Hekimliği, Biotechnology, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Klonlama, Koyunculuk işletmeleri, Koyunlar, Nanopartiküller, Oositler, Roscovitine, Trikostatin A, Cloning, Sheep farming enterprises, Sheep, Nanoparticles, Oocytes, Roscovitine, Trichostatin A
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Transgenik teknolojide başarıyı artıran klonlama (SCNT) yönteminin, çiftlik hayvanlarının üretiminde etkinliğinin düşük olması donör hücrenin yeniden programlanmasında yaşanan aksaklıklardan kaynaklıdır. Donör hücre DNA'sının oosit tarafından metilasyon seviyeleri düşürülerek oluşturulan yeniden programlamada, oosite bağlı yetersizliklerden kaynaklı kayıplar şekillenmektedir. Bu çalışmada; transgenik teknolojide SCNT yönteminin etkinliğinin artırılması amaçlı sağlıklı transgenik hücre eldesinde yüksek başarı sergileyen gen taşıyıcı nanopartiküler sistemlerin kullanılması ve donör nükleusun SCNT öncesinde yeniden programlanması amaçlı Roscovitine ve Trichostatin A inhibitörlerinin kullanılabilirliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Sunulan çalışmada, poli(β-amino ester) (PBAE), çift tabakalı hidroksit bileşiği (LDH), modifiye kitosan (mChi), Lipofectamine® polimerleri koyun primer erişkin (PKF) ve embriyonik (PKEF) fibroblast hücrelerinde transgenik etkinlikleri, apoptotik aktiviteleri membran bütünlüğü analizleri ile karşılaştırılmıştır. Çalışmada, transfekte PKF ve PKEF hücrelerinde, 15 µM Roscovitine veya 50 nM Trichostatin A ile 24 saat muamele etme, kontakt inhibisyon ve serum açlığına bırakma yöntemleri uygulanmış, hücre siklus dağılımları, apoptotik aktivite oranları ve DNA metilasyon oranları yönünden karşılaştırılmıştır. Çalışmanın sonucunda; transgenik hücre üretiminde PBAE'nin (%80,88) Lipofectamine®'e (%51,35) göre daha iyi sonuç verdiği (p<0,05), Roscovitine inhibitörünün koyun SCNT çalışmalarına yönelik hücre siklusunu senkronize etmeye uygun olmadığı (%58,51), serum açlığının iki hücre grubunda da erken ve geç apoptoz oranlarının yüksek olduğu (p<0,05), kontakt inhibisyon ve Trichostatin A gruplarının G0/G1 hücre(%87,33, %83,49) ve canlı hücre (%94,20, %92,58) oranları açısından en iyi sonuçları verdiği (p<0,05), PKF hattında 50 nM Trichostatin A ile en düşük DNA metillenme oranı (%16,79, p<0,05) görülmüştür. Sonuç olarak SCNT ile transgenik çiftlik hayvanı üretiminde PBAE'in gen transferinde başarılı şekilde kullanılabileceği ve 50 nM Trichostatin A ile muamelenin somatik hücre senkronizasyonunu sağlayacağı belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
The cloning (SCNT) method which increases the success in transgenic technology, has a low efficiency in farm animals because of the problems in the reprogramming of the donor cell. In the reprogramming of donor cell DNA, the methylation level decreases using oocyte. There are losses depending on oocyte deficiencies. In this study, it was aimed to increase the efficiency in transgenic technology by using nanoparticular gene carrier systems, which have high efficiency for transgenic cell production, and to investigate the usability of Roscovitine and Trichostatin A inhibitors for reprogramming donor nucleus for SCNT. Poly(β-aminoester) (PBAE), layered double hydroxide compound (LDH), modified chitosan (mChi) and Lipofectamine® have been used for transfection in sheep primary adult (PKF) and embryonic (PKEF) fibroblast cells. To synchronize the cells to G0/G1 phase and to decrease the methylation of the DNA, 24-hour treatment with 15 µM Roscovitine or 50 nM Trichostatin A, contact inhibition and serum starvation methods were used. PBAE (80.88%) showed better results than the Lipofectamine®(51.35%) in transgenesis (p<0.05). Roscovitine had no effect in synchronization(58.51%), high level of early and late apoptosis was obtained in serum starvation(p<0.05). The contact inhibition and Trichostatin A exhibited the best results in G0/G1 (87.33%,83,49%) and live cells (94.20%, 92.58%,p<0.05). The lowest DNA methylation rate(16.79%, p<0.05) was found in the PKF with 50 nM Trichostatin A. Consequently, PBAE could be an effective gene carrier for transfection of primary fibroblast cells and, the best results in synchronization and demethylation of DNA could be obtained by 50 nM Trichostatin A treatment.
Benzer Tezler
- In vıtro sığır blastosist üretimi üzerine tanımlanmış medyumların etkisi ve blastosistlerin farklı kriyoprezervasyon teknikleri ile dondurulması
In vıtro sığır blastosist üretimi üzerine tanımlanmış medyumların etkisi ve blastosistlerin farklı kriyoprezervasyon teknikleri ile dondurulması
TOLGA AKKOÇ
Doktora
Türkçe
2012
ZiraatNamık Kemal ÜniversitesiZootekni Ana Bilim Dalı
PROF. DR. M. İHSAN SOYSAL
PROF. DR. HAYDAR BAĞIŞ
- Transgenik tütünde CRISPR/CAS9 sistemi kullanılarak sistein proteaz gen (NtCP6) ekspresyonunun susturulmasına yönelik çalışmalar
Studies for silencing the protease gen (NtCP6) expression by using CRISPR/CAS9 system in transgenic tobacco
ÇİĞDEM BOZKURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA İNCİ ÖZDEMİR
PROF. DR. YELDA ÖZDEN ÇİFTÇİ
- Yüksek tuz toleransına sahip fasulye genotipinde tolerans ile ilgili transkripsiyon faktörlerinin belirlenmesi
Determi̇nati̇on of transcri̇pti̇on factors related to tolerances i̇n bean genotype wi̇th hi̇gh salt tolerances
GÖKHAN GÖKDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyoteknolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUSA KAVAS
- Begomovirus grubuna karşı CRISPR/Cas9 teknolojisiyle transgenik olmayan dayanıklı domates çeşidi geliştirme
Development of a transgene-free resistant tomato variety to begomoviruses
KÜBRA YILDIZ
- Targeting and activation of antigen specific CD8+ T cells with peptide-major histocompatibility complex I tetramers
Peptit-majör histokompatibilite kompleks I tetramerleri ile antijen spesifik CD8+ T hücrelerin hedeflenmesi ve aktivasyonu
ŞAFAK CEREN USLU ŞIVGIN
Doktora
İngilizce
2025
BiyoteknolojiHacettepe ÜniversitesiTemel Onkoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HANDE CANPINAR