İnsan adipoz kökenli mezenşimal kök hücre kaynaklı eksozom ve nanoveziküllerin, insan (HGRC1) ve sıçan (SIGC) granüloza hücre hatlarında siklofosfamid ile oluşturulan hasar üzerine koruyucu etkisinin incelenmesi
Investigation of the protective effect of human adipose mesenchymal stem cells-derived exosomes and nanovesicles against cyclophosphamide-induced damage on human (HGRC1) and rat (SİGC) granulosa cell lines
- Tez No: 656091
- Danışmanlar: PROF. DR. MAHMUT KEMAL ÖZBİLGİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Adipoz doku, Eksozomlar, Granüloza hücreleri, Hücre dizisi, Kök hücreler, Siklofosfamid, İlaç tedavisi, Adipose tissue, Exosomes, Granulosa cells, Cell line, Stem cells, Cyclophosphamide, Drug therapy
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Manisa Celal Bayar Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu çalışmada, in vitro şartlarda hem insan (HGrC1) hem de sıçan (SIGC) granüloza hücre hatlarında 4-hidroperoksi siklofosfamit (4-HC) ile apoptoz indüklenerek ADMSC'lerden elde edilen eksozom (EXO) ve nanoveziküllerin (NV) antiapoptotik ve terapötik etkilerinin incelenmesi amaçlanmaktadır. Gereç ve Yöntem: ADMSC'lerden EXO ve NV'ler izole edilerek karakterizasyonları flow sitometri yöntemi kullanılarak gerçekleştirildi. EXO ve NV'ler, HGrC1 ve SIGC hücre hatları ile hem tek başlarına hem de 4-HC ile birlikte kokültüre edilerek hücre canlılığı MTT yöntemi kullanılarak tespit edildi. Tüm uygulamalar sonrası apoptoz (Kaspaz 3, Bax ve Bcl-2) ve hücre proliferasyon (Ki-67) belirteçlerinin hem protein hem de mRNA ifade seviyeleri indirekt immunositokimya ve qRT-PCR yöntemleri ile analiz edildi. Ayrıca tüm gruplardaki hücre döngüsü analizleri flow sitometri yöntemi kullanılarak gerçekleştirildi. Bulgular: ADMSC EXO ve NV'lerinin tek başlarına HGrC1 ve SIGC hücre hatları ile kokültüre edilmesi sonrası granüloza hücre proliferasyonlarını indükledikleri saptandı. Her iki hücre hattında da 4-HC grubuna kıyasla 4-HC ile birlikte EXO ve NV ile kokültüre edilen gruplardaki Kaspaz 3 ve Bax ifadelerinin azaldığı Bcl-2 ve Ki-67 ifadelerinin ise arttığı tespit edildi. Buna ek olarak EXO ve NV'ler ile kokültüre edilen gruplarda S fazında tutulan hücre yüzdelerinin azaldığı, G2/M fazındaki hücre yüzdelerinin ise arttığı gözlendi. Sonuçlar: EXO ve NV'lerin, her iki granüloza hücre hattı üzerinde de sitostatik veya sitotoksik etkilerinin olmadığı, 4-HC'nin apoptotik etkisine karşı koruyucu kapasitelerinin olduğu ve bununla birlikte granüloza hücre proliferasyonunu indükledikleri gözlendi. Bu çalışma ile literatürde ilk defa ADMSC'lerden yapay olarak elde edilen NV'lerin, EXO'lar gibi benzer terapötik etkinliklerinin olduğu gösterildi. Bu sonuçlar, EXO ve NV'lerin, POI'nin önlenmesi ve tedavisinde etkili ve yeni bir yöntem olabileceğini düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
Aim: In this study, it is aimed to investigate the antiapoptotic and therapeutic effects of exosomes (EXO) and nanovesicles (NV) derived from ADMSCs by inducing apoptosis with 4-hydroperoxy cyclophosphamide (4-HC) in both human (HGrC1) and rat (SIGC) granulosa cell lines under in vitro conditions. Material and method: EXOs and NVs were isolated from ADMSCs and their characterization was performed using flow cytometry method. EXOs and NV's were cocultured with HGrC1 and SIGC cell lines both alone and together with 4-HC and cell viability was determined by using the MTT method. After all applications, both protein and mRNA expression levels of apoptosis (Caspase 3, Bax and Bcl-2) and cell proliferation (Ki-67) markers were analyzed by indirect immunocytochemistry and qRT-PCR methods. Moreover, the cell cycle analyzes in all groups were performed by using flow cytometry method. Results: It was determined that EXOs and NVs derived from ADMSC induced granulosa cell proliferation after coculturing with HGrC1 and SIGC cell lines. In both cell lines it was found that Caspase 3 and Bax expressions decreased and Bcl-2 and Ki-67 expressions increased in the groups which cocultured EXOs and NVs together with 4-HC compared to the only 4-HC group. In addition, it was observed that the percentage of cells kept in S phase decreased and the percentage of cells in the G2/M phase increased in the groups cocultured with EXOs and NVs. Conclusions: It was found that EXOs and NVs had no cytostatic or cytotoxic effects on both granulosa cell lines, they had protective capacities against the apoptotic effect of 4-HC and they also induced granulosa cell proliferation. It was found that EXO and NV do not have cytostatic or cytotoxic effects on both granulosa cell lines, they have protective capacities against the apoptotic effect of 4-HC and they also induced granulosa cell proliferation. With this study, it was shown for the first time in the literature that artificially generated NVs from ADMSCs have similar therapeutic effects like EXOs. These results suggest that EXO and NV's can be an effective and new method in the prevention and treatment of POI.
Benzer Tezler
- 1985-1986 yıllarında Polatlı Devlet Hastanesine kaza nedeniyle başvuranların incelenmesi
Başlık çevirisi yok
FERHAN ŞENOL
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
İlk ve Acil YardımGazi ÜniversitesiKazaların Çevresel ve Teknik Araştırması Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. HİKMET PEKCAN
- 1981 Türkiye tarımsal yapısının önemli bileşenleri ve tarımsal bölgelerin elde edilmesi
Principle components of Turkey's agricultural structure and to determine agricultural rigions in 1981
İHSAN KARABULUT
- Sivas'ta kadınların işgücüne katılım farklılıkları
Başlık çevirisi yok
BİNNUR ERCEM
Yüksek Lisans
Türkçe
1984
SosyolojiCumhuriyet ÜniversitesiKurumlar Sosyolojisi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FARUK KOCACIK
- Türkiye'de trafik kazalarının epidemiyolojisi
Başlık çevirisi yok
HARUN KARACA
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
UlaşımGazi ÜniversitesiKazalarda Acil Yardım ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HİKMET PEKCAN
- 1950-1975 dönemi sosyal yapı değişiminin konut tasarımına etkisi Ankara-Kavaklıdere örneği
1950-1975 period effects of changes in social structure on planning of residences -Ankara, Kavaklıdere eraple
ADNAN AKSU