Kütdiken limon (Citrus limon (l.) burm f.) çeşidinde genetik transformasyon ve transgenik bitkilerin elde edilmesi
Genetic transformation of kütdiken lemon (Citrus lemon (l.) burm f.) variety and regeneration of transgenic plants
- Tez No: 65406
- Danışmanlar: PROF. DR. N. KEMAL KOÇ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Ziraat, Agriculture
- Anahtar Kelimeler: Kütdiken limonu, genetik transformasyon, Agrobacterium, protoplast, DNA-uptake, Bitki koruma, Genetik, Limon, Kütdiken. lemon, Agrohactermm, genetic transformation, protoplast, DNA-uptake. n, Plant protection, Genetics, Lemon
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Bitki Koruma Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
öz DOKTORA TEZİ KÜTDİKEN LÎMON (Citrus Limon (L.) Burm. f.) ÇEŞİDİNDE GliNliTİK TRANSFORMASYON VB TRANSGKNİK BİTKİLERİN ELDE EDİLMESİ Mukadder KA YIM ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ BİTKİ KORUMA ANABİLİM DALI Danışman : Prof. Dr. N. Kemal KOÇ Yıl: 1997, Sayfa: 176 Jüri : Prof. Dr. N. Kemal KOÇ :Prof. Dr. M. Asil YILMAZ Prof. Dr. Haluk SORAN Agrobacterium ve PEG aracılığı ile Küldiken limon (Citrus limon (L.) Burm.f.) çeşidinde gen transferi sisteminin kurulması ve transgenik bitkilerin elde edilmesi amacı ile yapılan bu çalışmada sürgün ucu, yaprak, kotiledon yaprak, epikotil, hipokotil, gövde parçası, embriyo ve ovüler kallusların transformasyonunda doğal ve disarmed Agrobacterium ırkları kullanılmıştır. Doğal A. tumefaciens ırkları ile Kütdiken limonu eksplantlarının transformasyonu sonucunda en yüksek etkinliği yaprak eksplantlarında % 100 tümör oluşumu ile A208, bunu % 83 ile A396 ve embriyolarda % 13.04 etkinliği ile A348 ırkı izlemiştir. Doğal A. rhizogenes ile yapılan transformasyonlarda ise hiç bir eksplant dokuda saçak kök oluşumu gözlenmemiştir. Ölçülebilir markır olarak gus genini, seçilebilir markır olarak kanamisine dayanıklılığı sağlayan npt U genini taşıyan ikili vektörlerden pVW432 plazmidini içeren disarmed LBA4404 bakteri ırkı ile yapılan transformasyonlarda stabil transformasyon sıklıkları histokimyasal GUS analizinin güs geni için pozitif sonuç vermesine göre değerlendirilmiştir. Stabil transformasyon sıklıkları tohumlarda %53.3, epikotil sürgünlerinde % 3.3, KT2 ve KS2 gövde parçalarında % 28.5-50 ve ovüler kalkışlarda % 0.001 olarak saptanmıştır. NPT 11 ve dalapon herbisitine dayanıklılığı sağlayan dhl genini içeren pVW291 plazmidini içeren LBA4404 ve EHA101 ırkları ile Kütdiken limonu epikotil parçalarının transformasyonları sonucunda % 33.3-37.5, KT2 ve KS2 gövde parçalarının transformasyonları sonucunda ise % 25-58.3 transformasyon sıklığında tahmini transgenik sürgünler elde edilmiştir. NPT U ve gus genini içeren transgenik sürgün ve doku parçalan southern blot hibridizasyonu ve PCR analizleri ile de ispatlanmıştır. PEG aracılığı ile sirküler yapıdaki pBI221.2 plazmid DNA'mn Kütdiken limonu ovüler kallus protoplastlarına direkt aktarımı ile 6x1 06 transformasyon sıklığında stabil transgenik hücreler histokimyasal GUS analizi ile belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PhD. THESIS GENETIC TRANSFORMATION OF KUTDIKEN LEMON ( Citrus Limon (L.) Burnt, f. ) VARICTY AND REGENERATION OF TRANSGENIC PLANTS Mukadder KAYIM DEPARTMENT OF PLANT PROTECTION INSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENCES UNIVERSITY OF ÇUKUROVA Supervisor :Prof. Dr. N. Kemal KOÇ Year: 1997, Page: 176 Jury Prof. Dr. N. Kemal KOÇ Prof. Dr. M. AsÜ YILMAZ Prof. Dr. Haluk SORAN This study was carried out in order to obtain transgenic lemon (Citrus lemon (L.) ev Kütdiken) plants by setting up gene transfer system via Agrobactcrium and PEG. Both wild type and disarmed strains of Agrobacterium were used to transform several different explants including shoot-tips, leaves, cotyledon leaves, epicotyles, hypocotyles, stem segments, somatic embryos and ovular calli. After the transformation of Kütdiken lemon explants with wild type strains of A.tumefaciens, the highest efficiency in tumour formation was scored at 100 % with leaf explants by A208 strain. It is followed with 83 % by A396 strain and 13.04 % by A348 strain on embryos. In the case of transformation experiments carried out using wild type A. rhizogenes, no hairy-root formation was observed on the explants. In the transformation undertaken with disarmed LBA4404 strain harboring the binary vector pVW432 plasmid carrying the genes for the scorable marker gus and selectable marker npt II determining resistance to kanamycin, stable transformation efficiencies were evaluated according to histochemical GUS+ assays for gus gene. The stable transformation efficiencies were estimated to be 53.3% in seeds, 3.3% in epicotyl shoots, 28.5-50% in stem segments of KT2 and KS2 lemon lines and 0.001% in ovular calli. Putative transgenic shoots were obtained from the transformation of epicotyl segments by the 33.3-37.5% frequency and stem tissues of KT2 and KS2 lines by the 25-58.3% frequency where LBA4404 and EHA101 bacteria strains harboring pVW291 plasmid including npt II gene and dhl gene determining resistance to dalapon herbicide. Transgenic shoots and tissue segments containing npt II and gus genes were also confirmed by southern blot and PCR analysis. Stable transgenic cells were detected by histochemical GUS analysis in a 6x1 06 transformation frequency where the cells come out by direct transformation of circular PB 122 1.2 plasmid DNA through PEG into ovular calli protoplasts of Kütdiken lemon.
Benzer Tezler
- Limonda uçkurutan hastalığı etmeni phoma tracheiphila (kanc. et. ghick.)'nın toksinine dayanıklı hücre hatlarının in vitro seleksiyonu ve moleküler analizi
In vitro selection of resistant lines to phoma tracheiphila (kanc. et. ghick.) toxin the agent of mal secco disease and molecular characterization of the lines
BERNA BAŞ
Doktora
Türkçe
2000
ZiraatÇukurova ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
PROF. DR. N. KEMAL KOÇ
DOÇ. DR. ALİ ERKILIÇ
YRD. DOÇ. DR. AKİF ESKALEN
- Turunçgil dal yanıklığı hastalığı etmeninin (Pseudomonas syringae van Hall) tanımı ve etmene karşı turunçgil çeşitlerinin dayanıklığının saptanması
Başlık çevirisi yok
YEŞİM AYSAN YİĞENOĞLU
- Turunçgillerde yaprak kırışıklığına neden olan virüs hastalıklarının biyolojik, serolojik olarak tanımlanması ve serolojik ilişkilerinin saptanması
Biologic and serologic identification and detection of serologic relation of citrus crinkle virus diseases
NEVCİHAN POSLUOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
ZiraatÇukurova ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SAADETTİN BALOĞLU