Establishment of an experimental system to study p53 effects in Saccharomyces cerevisiae
p53 proteinin Saccharomyces cerevisiae mayasındaki etkilerini incelemek için deney sisteminin oluşturulması
- Tez No: 65021
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Bira mayası, Mayalar, Protein-P53, Yeast, Yeasts, Protein-P53
- Yıl: 1997
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
p53 proteinin Saccharomyces cerevisiae mayasındaki etkilerini incelemek için deney sisteminin oluşturulması Tuba Dinçer Yüksek Lisans Tezi,Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü Tez yöneticisi: Prof. Dr. Mehmet Öztürk Ağustos 1997, 82 Sayfa Bu çalışmanın amacı, Saccharomyces cerevisiae maya hücrelerinde insan p53 proteininin ve mutant formunun etkilerini görmek için deneysel bir modelin oluşturulmasıdır. p53 proteininin DNA hasarına karşı tepki gösteren ve bu şekilde genom dengesini kontrol eden bir protein olduğu memeli hücrelerinde daha önce gösterilmişti. Biz DNA hasarına karşı insan p53 proteininin maya hücresinde gösterdiği etkilerle ilgilendik ve bunun için de ilk olarak mayada deneysel bir sistem kurduk. Bu deneysel sistemin oluşturulmasında, mutant p53-248W proteinini ekspres eden pAK31 plasmidi ve kontrol olarakta bu proteini ekspres etmeyen pL3 plasmidi kullanıldı. Bu şekilde mutant p53 ekspres eden ve etmeyen iki farklı maya hücre populasyonu oluşturuldu. p53 proteininin hücre çoğalmasını engellediğini gösteren raporlardan dolayı çalışmalarda p53 proteini kullanılmadı. Bu sistemde ilk olarak pAK31 vektörü ile transforme edilen maya hücrelerinde, p53 proteinininin ekspresyonu gösterildi. Daha sonra mutant p53-248W proteininin, maya hücrelerinin büyüme hızına etkisi analiz edildi ve mutant p53 ekspres eden ve etmeyen maya hücrelerinin büyüme hızında hiçbir fark görülmedi. Mutant p53-248W proteininin maya hücrelerinde, DNA hasarına karşı bir tepki gösterip göstermediğini kontrol etmek için maya hücreleri DNA hasarına yol açan, UVC-ışınlarına ve cisplatine maruz bırakıldı. Memeli hücrelerinde p53 proteininin DNA zararına tepkisi daha önceden UVC-ışınları ve cisplatinle gösterilmişti. p53 geninin arjinin amino asidine denk gelen 248. kodonu en sık rastlanan mutasyon noktası olmasının yanısıra p53 proteininin DNA ile etkileşen kısmıdır. Mutant p53-248' in (arg->trp) DNA ile etkileşimindeki özgüllüğünden yoksun kalması dolayısıyla transkripsiyon faktörü olarak işlev görme özelliğini kaybeder. Mutant p53-248W proteininin DNA hasarına gösterdiği tepki hakkında çok fazla rapor bulunmamakla beraber, bir rapor da UVC-ışını karşısında mutant p53-248W proteininin aktif genlerin tamirini azalttığı gösterilmiştir. Bu çalışmada mutant p53-248 proteini ekspress eden maya hücrelerinin, DNA hasan sonucunda hücrelerin canlı kalmasına olan etkisine paralel olarak, bu hücrelerde mutant p53 protein seviyeleri de incelenmiştir. DNA hasan karşısında mutant p53- 248W proteininin canlı kalan maya hücresi sayışma etkisi belirlenmediği gibi p53 protein seviyesinde de bir farklılık görülmemiştir. iv
Özet (Çeviri)
Establishment of an experimental system to study pS3 effects in Saccharomyces cerevisiae Tuba Dinçer M. S. in Molecular Biology and Genetics Supervisor: Prof. Dr. Mehmet öztürk August 1997, 82 pages The aim of this work was to establish an experimental model to study human wild type and mutant p53 protein effects in yeast Saccharomyces cerevisiae cells. Wild type p53 was previously shown to be a DNA damage response gene that controls the genome stability in mammalian cells. We are interested in using yeast cells to study human p53-mediated cellular events after DNA damage. In this study we established an experimental model as an initial step. For construction of this system pAK31 plasmid expressing a human mutant p53-248W as well as control plasmid pL3 were used to obtain two different yeast cell populations, one expressing the mutant p53 248W protein and the other without p53 expression. Wild type p53 expression vector was avoided because of its known growth inhibitory effects in yeast cells. In this experimental system initially p53 expression at pAK31 transformed yeast cells was shown. Then, the effect of mutant p53-248W expression to growth rate of yeast cells was analysed and no growth rate difference was detected between the cells expressing and non-expressing mutant p53-248W protein. To test the participation of mutant p53-248W protein in DNA damage response in yeast cells, cells were exposed to DNA damaging agents; UVC and cisplatin that were reported to induce wild type p53 protein in mammalian cells. Codon 248 is a common site of 'hot spot'mutation and the arginine residue that corresponds to codon 248 encoded by the wild type p53 sequence is in the DNA interacting face of the p53 protein. Mutant p53-248 (arg->trp) is defective in specific DNA binding and it has lost the ability to act as a transcription factor. Although there are not many reports about mutant p53-248W response to DNA damaging agents, it was shown that mutant p53- 248W exhibit decreased repair of active genes upon UV radiation. In this study cell survival was analysed in mutant p53-248W protein expressing yeast cells in parallel to mutant p53 protein levels following to DNA damage and no effect of mutant p53 248W expression on cell survival upon DNA damage was detected. Also no difference was detected in mutant p53 protein levels following DNA damage. in
Benzer Tezler
- Dişli çark hata ve hasarlarının titreşim analizi ile belirlenmesi
Identifying the faults in gears with vibration analysis
VOLKAN SİPAHİ
- Francis Türbinli Tesislerde Dönen Vorteks Çekirdeğinin geçici rejimlere etkisinin rolü
An Investigation on the influence of rotating vortex rope on transiet working conditions for Francis turbine power plants
METİN GÜLEÇ
- Sodyum perborat kristalizasyonunun stokiometrik ve stokiometrik olmayan şartlarda incelenmesi
Investigation of crystallization of sodium perborate at stoichiometric and non-stoichiometric conditions
G.YILDIZ YÜKSEL
- Çok parçalı sistemlerin analizine bir örnek: azdırma malafa sisteminin deformasyon analizi
An Example to the analysis of multi-part systems: defermation analysis of an arbor mechanism in a hobbing machine
ERKAN GÜRSEL
- Linyit yakan değişik dağıtıcı elekli akışkan yataklarda ayrışma ve aglomerasyon
Segregation and agglomeration in lignite burning fluidised beds with different distrubutor plates
M.FERHAT YARDIM
