Hücre dışı genom materyallerinin hematopoetik kök hücreler üzerindeki etkisi
The effect of extracellular genome materials on hematopoietic stem cells
- Tez No: 644128
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Moleküler Tıp, Genetik, Tıbbi Biyoloji, Molecular Medicine, Genetics, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Genom, Hematopoetik kök hücreler, JAK 2, Kök hücreler, Miyeloproliferatif hastalıklar, Mutasyon, Neoplazmlar, Genome, Hematopoietic stem cells, JAK 2, Stem cells, Myeloproliferative disorders, Mutation, Neoplasms
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu tezin ana amacı HKH'leri(Hematopoetik kök hücreler) başarıyla transfekte etmek ve bunlarda oluşan hücresel fonksiyon değişimlerini saptamaktır. Tüm biyolojik sıvılarda buluna hücre dışı genom materyallerinin(hdGM), hücrelerden salınarak komşu ve distal hücrelere entegre olabildiği bilinmektedir. Onkogen taşımaları halinde, hdGMler normal hücreleri onkojenik olarak transformasyona uğratabilir ve sonuçta genometastaz gelişebilir. Hücreler arasındaki etkileşimindeki bu rolleri nedeniyle, bu çalışmada hdGMler transfeksiyon için kullanılmış ve HKH'lerin kanser kök hücrelerine farklılaşabildikleri gösterilmeye çalışılmıştır. Yöntem: Sağlıklı bireylerden kordon kanları toplanarak mononükleer hücre izolasyonu yapıldı. Ardından CD34+/- hücreler seçildi. HEL hücre hattı JAK2V617F nokta mutasyonunu biallelik taşıması nedeniyle, K562 hücre hattı ise BCR/ABL pozitif olması nedeniyle kullanıldı. CD34+/- hücreleri ise, bu kültürden elde edilen serumlar ile transfekte edildi. Bu transfekte hücrelerde gerçekleşen değişimleri saptamak amacıyla, progenitör hücre koloni deneyleri, apoptoz ve hücre proliferasyon deneyleri ve immünfenotipleme yapıldı. Bulgular: CD34+/- hücreleri HEL serumuyla 24 saat boyunca muamele edildiğinde JAK2V617F mutasyonunu monoallelik geliştiği, süre 48 saat olduğunda mutasyonun biallelik geliştiği saptandı. BCR/ABL1 taşıyan K562 hücrelerinden elde edilmiş serumla transfeksiyon sonrasında HKH'lerin BCR/ABL1 pozitifliğinin tüm örneklerde geliştiği (%100) belirlendi. Hematopoietik progenitor kolonilerinde transfekte HKH kolonilerinde, JAK2V617F mutasyonu %XX oranında gösterildi. Kolonilerde, BCR/ABL1 füzyon geni ise %XX oranında gösterildi. Transfeksiyon sonrasında yapılan hücre fonksiyon analizleriyle, apoptozda tutarlı değişiklik olmadığı, ancak HEL serumu uygulandığında STAT5 ekspresyonun arttığı, K562 serumu eklendiğinde ise CD45, CD16+56, CD14'de artış görüldü. Sonuç: Bulgularımız, hdGM'lerin taşıdıkları onkogenleri, salındıkları hücrelerden farklı hücrelere lateral olarak transfer edebildiği ve bu hücrelere onkojenik özellik kazandırarak hücrenin biyolojik özelliklerini değiştirebildiğine dair literatür bilgisini desteklemektedir. Bu çalışma ile ilk defa olarak, JAK2V617F mutasyonu ve BCR/ABL1 füzyon genlerinin HKH'lere hdGM aracılığıyla entegrasyonunun mümkün olduğunu gösterdik. Bu veriler, hdGM'lerin hücreler arası iletişimde rolü olduğunu ve genometastaza katkıda bulunduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Aim:Main aim of thesis is successfully transfected HSC(Hematopoietic stem cells) and determine cellular function changes. Extracellular genome materials(EGM) found in all biological fluids which can released from cells and integrated into neighboring and distal cells.EGMs may carry oncogenes, they can oncogenically transform normal cells.Because of roles in the interaction between cells, EGMs were used for transfection in this study and it was show that HSCs can differentiate into cancer stem cells. Methods:Cord blood was collected from donors and mononuclear cells were isolated. Then, CD34+/- cells were sorted. HEL cell was used because it carries the JAK2-V617F biallelic and the K562 cell was BCR/ABL1 positive. CD34+/- cells were transfected with serum collected from these cultures. In order to detect changes in transfected cells, ımmunophenotyping was performed with progenitor cell colony(PCC), apoptosis and proliferation assays. Results: HEL serum transfected CD34+/- cells were detected the JAK2-V617F mutation monoallelic in 24h.When the incubate period was 48 hours, HSCs were JAK2-V617 mutation biallelic. After transfection, all samples(100%) of K562 serum transfected HSCs were detected BCR/ABL1 positive. While JAK2-V617F mutation was shown at a rate of 50% in transfected PCC; BCR/ABL1 was shown at a rate of 6%. after transfection, the cell function analysis was performed. After transfection, the cell function analysis was increased as apoptosis of CD34- cell, pSTAT5 in HEL/CD34+/- , lympocyte count in K562 serum/CD34+/-. Conclusion:Our findings support literature that EGMs can transfer the oncogenes, carry from the cells they are released to different cells laterally and change biological properties of cell by giving these cells oncogenic properties. In this study, we have shown for the first time that it is possible to integrate the JAK2-V617F mutation and BCR/ABL1 fusion genes into HSCs via EGMs. These data show that hdGMs play a role in intercellular communication and contribute to genometastasis.
Benzer Tezler
- Miyeloproliferatif neoplazi kökenli hücre dışı genomik materyallerin endotel hücrelere etkisinin incelenmesi
An analysis of the effect of myeloproliferative neoplasm-derived extracellular genomic materials on endothelial cells
CEMAL ÇAĞIL KOÇANA
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Genetikİstanbul ÜniversitesiGenetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
- Küçük hücreli dışı akciğer kanserinde cisplatin direnci gelişiminde rol oynayan genetik faktörlerin CRISPR-CAS9 tabanlı tüm genom tarama sistemiyle belirlenmesi
Determination of genetic factors role in the development of cisplatin resistance in non-small cell lung cancer by CRISPR-CAS9 based whole genome screening system
HALE GÜLER KARA
- Fibrosarkoma ve deri fibroblast hücre hatlarının karşılaştırmalı proteomik analizleri
Comparative proteomic analysis of fibrosarcoma and skin fibroblast cell lines
ÖĞÜNÇ MERAL
- CRISPR/Cas9 genom düzenleme aracı kullanarak TGFBI geninde R124H mutasyonu oluşturmaya yönelik gRNA ve donör DNA tasarlama ve dh5α vektörüne klonlama
Design of donor DNA sequences with gRNA for creating the R124H mutation in the TGFBI gene and creation of CRISPR/Cas9 structures
BÜŞRA KALDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi BiyolojiSelçuk ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HİLAL ARIKOĞLU
- Vazookluziv kriz ile başvuran orak hücre anemili hastalarda mikrorna düzeylerinin krizle ilişkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of microrna expression during painful crisis and steady state in sickle cell anemia
İKBAL TÜRKER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2016
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıÇukurova ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YURDANUR KILINÇ