Geri Dön

Development of hematomir technologies for the hematopoietic stem cells ex vivo expanion

Hematopoietik kök hücrelerin ex vıvo çoğaltılmasında hematomir teknolojilerin geliştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 642819
  2. Yazar: MERVE USLU
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Genetik, Biyoteknoloji, Genetics, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Hematopoietic kök hücre (HKH) trasplantasyonu, birçok hematopoietik hastalığın tedavisinde kullanılan temel terapötik yöntemdir ve az sayıda bulunan HKH'lerin tüm kan hücrelerini repopüle etmesi yeteneğiyle sağlanır. Uygun donörün sınırlı bulunmasının yanı sıra, yeterli sayıda donör HKH duyulan ihtiyaç klinik açıdan önemini korumaktadır. Bu sorun, HKH'lerin ex vivo çoğaltılmasıyla ele alınsa da sınırlı başarı sağlamaktadır ve HKH'lerin çoğaltılmasını sağlayabilecek alternatif stratejilerin geliştirilmesi gerekmektedir. Bu nedenle, HKH spesifik in vivo nakavt edilmiş yaklaşık 200 geni inceledik ve genlerin işlev kaybı fenotiplerini belirledik. Bu genlerden 57'si en az bir buçuk kat kök hücre havuzunu artırmıştır. Ayrıca, bu hematopoietic faktörlerin 3'UTR bölgesini hedefleyen sekiz miRNA kök sekansları, tahmin algoritmaları kullanarak belirlenmiştir. HKH dormansı faktörlerini hedefleyen ve HKH'lerin ex vivo çoğaltılmasını sağlayabilecek, RNA interferans temelli teknoloji olan HematoMiR'leri geliştirmeyi amaçladık. HKH'lerin dormansisinde yer alan 50'den fazla faktörü hedefleyen HematoMiR'ler, etkili biçimde ex vivo murin ve insan HKH'lerin çoğaltmasını sağlamaktadır. HematoMiR-5 ile ex vivo çoğaltılmış HKH'lerin hücre döngüsüne girişinin arttığı ve HKH yaşlanması göstermeden, negative hücre döngüsü düzenliyiclerinin gen ekspresyonlarını da azaltarak artan hücre döngüsü göstermiştir. HematoMiR-5, HKH'lerin kendini yenileme kabiliyetlerinin sürdürmüş ve apoptoz oranında değişilik olmamasını sağlamıştır. HematoMiR-5 ex vivo çoğlatılmış HKH transplantasyonu, alıcı hayvanlarda başarılı engraft ve repopülasyon kapasitesi göstermiştir. HematoMiR-5 ile hematopoietik faktörlerin susturulması, aşırı ROS üretimine yol açmamış ve oksidatif strese bağlı genlerin expresyonunu azaltmıştır. HematoMiR-2 ve HematoMiR-5 ile muamele edilen murin HKPH'ler, aktif hücre döngüleri boyunca DNA hasarını azaltmıştır. Ayrıca, seçilmiş HematoMiR'lerin farklı kombinasyonel karışımları, etkin ex vivo HSC çoğaltılması için belirlenmiştir. Sonuçlarımız, HematoMiR teknolojisinin HKH dormansı modülatörlerini sekansa bağlı regülasyon yaparak HKH ex vivo çoğaltılmasının sağladığını göstermektedir. Bu çalışma ICGEB tarafından CRP/TUR15‐02_EC numaralı proje ile desteklenmiştir.

Özet (Çeviri)

Hematopoietic stem cells (HSCs) transplantation is the primary therapeutic modality used to treat many hematopoietic disorders. It based on the capability of a small quantity of HSCs to repopulate whole blood lineages. Along with limited availability of suitable donor, the need for sufficient number of donor HSCs are still challenging in clinical relevance. This has been addressed via ex vivo HSC expansion albeit with restricted success and development of alternative strategy that could improve HSC expansion is required. To this end, we examined about 200 genes that are specifically knockout in HSCs in vivo and determined the loss-of-function phenotypes of gene. 57 of these genes increased at least one and half fold stem cell pool or cell cycle activity. Besides, eight seed sequences of miRNAs using prediction algorithms to target 3' UTR of these hematopoietic factors were determined. We aimed to develop synthetic RNA interference (RNAi) based technologies, namely HematoMiRs, targeting of HSC quiescence factors that could be utilized for the expansion of HSCs ex vivo. Here, we found that HematoMiRs targeting over 50 factors involved in HSC quiescence induced robust ex vivo murine and human HSCs expansion. Ex vivo expanded HSCs with HematoMiR-5 treatment revealed enhanced HSC entry into cell cycle and increased cycling through down-regulation of negative cell cycle regulators without causing HSC senescence. HematoMiR-5 treatment led to sustained HSCs self-renewal ability and no increased change in apoptosis rate of HSCs. HematoMiR-5 expanded HSCs transplantation demonstrated successful engraftment and repopulation capacity in the recipient animals. HematoMiR-5 directed silencing of hematopoietic factors did not result in excessive ROS production and down-regulated several oxidative stress related gene expression. HematoMiR-2 and HematoMiR-5 treated murine HSPCs reduced DNA damage during the time course of their actively cycling. Furthermore, different combinatorial treatments of selected HematoMiRs mixture determined for robust ex vivo HSC expansion. Our results suggest that HematoMiRs technology provides HSC ex vivo expansion through the sequence-dependent regulation of HSC quiescence modulators. This project was funded by ICGEB (CRP/TUR15‐02_EC).

Benzer Tezler

  1. Tez No

    478044

    Santral juguler venöz katater uygulamalarında ultrasonografik ileri iğne teknolojilerinin etkinliği

    The role of ultrasonographic advanced needle technologies in central jugular venous catheter applications

    ALPER ŞENER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    İlk ve Acil YardımEge Üniversitesi

    Acil Tıp Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. FUNDA KARBEK AKARCA

  2. Tez No

    103118

    Sıçan akut subdural hematom modelinde iskemi ve ödem oluşumu ile NMDA antagonistleri memantin ve MK-801'in iskemiye etkilerinin araştırılması

    Development of ischemia and edema in a rat model of acute subdural hematoma and effects of NMDA antagonists memantine and MK-801 on ischemia

    OSMAN ARICA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Nöroşirürjiİstanbul Üniversitesi

    Nöroşirürji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. TALAT KIRIŞ

  3. Tez No

    688739

    Ventriküloperitoneal şant cerrahisi uygulanan hastalarda subdural hematom gelişimi

    Development of subdural hematoma in patients which was applied ventriculoperitoneal shunt surgery

    FATİH DEMİR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    NöroşirürjiFırat Üniversitesi

    Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SAİT ÖZTÜRK

  4. Tez No

    839839

    Total laparoskopik histerektomi ameliyatlarında pelvik yıkama yapılan ve yapılmayan olgularda postoperatif kaf hematomu veya kaf apsesi gelişiminin karşılaştırılması

    Comparison of the development of postoperative cuff hematoma or cuff abscess in total laparoscopic hysterectomy with and without saline irrigation

    HARUN HAZAR BAHRAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Kadın Hastalıkları ve DoğumSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BERNA ASLAN ÇETİN

  5. Tez No

    334328

    Subkutan heparin enjeksiyonu sonrası yapılan topikal uygulamaların ekimoz ve hematom gelişimine etkisi

    The effect of topical applications performed after subcutaneous heparin injection on development of bruise and hematoma

    MEHTAP DURSUN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    HemşirelikAtatürk Üniversitesi

    Hemşirelik Esasları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. REVA BALCI AKPINAR

Geri Dön