Engineering and systematic comparison of constitutive promoters in various lines of chinese hamster ovary cells
Konstitütif promotörlerin mühendisliği ve çeşitli çin hamsteri yumurtalik hücre hatlarinda sistematik karşilaştirmasi
- Tez No: 544517
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ŞERİF ŞENTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: CHO, rekombinant DNA teknolojisi, promotör gücü, çift promotör sistemi, Genetik, Genler, Over, Promotor bölgeler-genetik, Rekombinasyon-genetik, Sıçanlar, CHO, recombinant DNA technology, promoter strength, dual promoter system, Genetics, Genes, Ovary, Promoter regions-genetic, Recombination-genetic, Rats
- Yıl: 2019
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: İzmir Uluslararası Biyotıp ve Genom Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Son yirmi yılda, moleküler biyoteknolojideki gelişmelerin ardından, rekombinant biyoteknolojik ilaçların üretimi önemli ölçüde artmıştır. Çin hamsteri yumurtalık hücreleri endüstriyel biyoterapötiklerin üretiminde en çok tercih edilen memeli hücre ekspresyon sistemidir. Bu hücrenin avantajları süspansiyonda büyüyebilmesi, insan benzeri translasyon sonrası modifikasyonlar yapabilmesi ve iyi karakterize edilmiş transfeksiyon ve gen amplifikasyon sistemlerine sahip olmasıdır. Bu çalışmayı gerçekleştirmek amacıyla, rekombinant DNA teknolojisini kullanarak, yeni bir çift promotör raportör sistemi tasarladık. Bu sistem ile çeşitli CHO hücre hatlarında doğal viral, memeli ve endojen promotörleri en yüksek seviyede protein ekspresyonu için sistematik olarak karşılaştırıldı. İlk olarak, CHO-WT, CHO-DG44 ve CHO-DG44 süspanse hücre hatlarında promotör aday panelimizi (CMV, SV40, HSV TK, PGK, EFS, EF1a, UBC, CAG ve CHEF1a) test ettik. Lusiferaz analizi sonucunda, en yüksek raportör aktivitesini CMV promotöründe tespit ettik. Lusiferaz sonuçlarımızı, seçili dört promotörün akış sitometrisinde analiz edilmesi ile destekledik. Sonrasında, seçtiğimiz beş promotörü stabil hücre hatlarında karşılaştırmak amacıyla, DHFR içeren vektöre yerleştirdik. Stabil hücre hatlarının elde edilmesi halen devam etmektedir. Tamamlandığında, çift promotörlü sistemimiz ile güçlü beş promotörü uzun süreli hücre kültürü için karşılaştırabileceğiz. Sonuç olarak, çift promotör raportör sistemi, tipik olarak iki vektörün beraber verilmesinde görülen problemleri ortadan kaldırdı ve CHO hücrelerinde yüksek ekspresyon seviyeleri sağlayan güçlü düzenleyici elementleri tanımlamak için faydalı bir sistem olduğu kanıtlandı.
Özet (Çeviri)
Following the developments in molecular biotechnology over the past two decades, the production of recombinant biological drugs has increased significantly. Chinese Hamster Ovary (CHO) cells are essentially the most preferred mammalian cell expression system for industrial manufacturing of biotherapeutics because of easy adaptation to grow in suspension, human-like post translational modifications and well-characterized transfection and gene amplification systems. In the present study, using recombinant DNA technology, we engineered a novel all-in-one dual-promoter reporter system to systematically compare the strength of natural viral, mammalian and endogenous promoters for high level of protein expression in various lines of CHO cells. We firstly studied a large panel of candidate promoters (CMV, SV40, HSV TK, PGK, EFS, EF1a, UBC, CAG and CHEF1a) in CHO-WT, CHO-DG44 and CHO-DG44 suspension cell lines for transient gene expression. Of nine promoters, luciferase assay revealed that CMV achieved the highest reporter activity. We supported our luciferase assay results via repeating the comparison of three strong promoters and one weak promoter with flow cytometry. Then, five strongest promoters were selected and placed on the backbone having mouse DHFR coding sequence to test the promoter strength in stably transfected cells. The recovery of stable cells is still in progress. So, after recovery, we will be able to compare these five strong promoters with our dual promoter system in long term culture. Conclusively, the dual-promoter reporter system eliminated the problems in co-transfection assays and proved to be a useful system to identify strong regulatory elements ensuring high levels of expression in CHO cells.
Benzer Tezler
- Yapı üretiminde toplam kalite yönetimi ve kerpiç yapı üretiminde uygulanması
Başlık çevirisi yok
TUĞŞAD TÜLBENTÇİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Mimarlıkİstanbul Teknik ÜniversitesiMimarlık Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BİLGE IŞIK
- Multi-objective optimization of swirl burner with premixed ammonia/hydrogen flame
Ön karışımlı amonyak/hidrojen alevine sahip girdaplı yakıcının çok hedefli optimizasyonu
MEHMET ANIL GÜLŞAN
Doktora
İngilizce
2026
Makine Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YAKUP ERHAN BÖKE
- Farklı lif malzemelerinden oluşan çok katmanlı zırhların hesaplamalı balistik analizi
A computational study of ballistic response in multi-layer textile protection systems
LÜTFULLAH TAHA HALICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2026
Uçak Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiUçak ve Uzay Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEHER EKEN
- Alternatif yakıt olarak amonyak, biyodizel ve metanolün içten yanmalı denız motorları için yaşam döngüsü değerlendirmesi
Life cycle assessment of ammonia, biodiesel and methanol as alternative fuels for marine internal combustion engines
EYLÜL NESLİ İDİLER TURHAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Denizcilikİstanbul Teknik ÜniversitesiEndüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ŞEYDA SERDAR ASAN
- An integrated and systematic characterization methodology for vacuum bag only prepregs
Vakum torbalama prepreg sistemleri için entegre ve sistematik karakterizasyon metodolojisi
MUHAMMED HASAN ARIKAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Makine MühendisliğiSabancı ÜniversitesiÜretim Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HATİCE SİNEM ŞAŞ ÇAYCI