Purification and spectral and catalytic characterization of nadh-cytochrome b5 reductase from lung microsomes
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 5435
- Danışmanlar: PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1989
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
NADH-SİTOKHOM b- HEDÖKTAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE SPEKTRAI VE KATALİTİK KARAKTERİZASYONU Güray, Tülin Fen Bilişleri Enstitüsü Biyokimya Anabilin Dalı, Doktora Tezi Tez Yöneticisi Prof.Dr. Emel Arınç 87 Sayfa, Şubat 1989 ÖZET NADH-sitokron beredüktaz enzimi (B.C. 1,6.2.2) koyun akciğer mikrozomlarından, deterjanlar (kolat ve Emulgen 913) varlığında, birinci ve ikinci DEAE-cellulose ve 5'-ADP-agarose kolon kronatograf ileri ile mikrozomlara oranla % 6 verimle saflaşt İrildi. Saflaştırılan enzim, SDS-poliakrilamit jel elektroforezinde tek protein bandı verdi. Akciğer redüktaz enziminin moleküler ağırlığı 3^§500 + 1,500 olarak bulundu ve % O.k deoksikolat varlığındaki Sephadex G-200 kolon kromatografisl sonucu aktif subunlt moleküler ağırl iğinin 68,500 olduğu gözlendi. Tripsin uygulanan redüktaz enzimi SDS-poliakrilamit jel elektroforezin de 28,000 ve 25,000 ağırlığında İki ekstra protein bandı verdi. Saflaş- tınlraiş enzimin prostetik gurup olarak FAD içerdiği ve absorpslyon spektrumunda karakteristik FAD tepeciklerini içerdiği bulundu. Koyun akciğer redüktaz enziminin maksimi» aktivitesl için optimum koşullar incelendi. KB değerleri sltokrom b^ ve NADH için Q.l6? jaM ve 7.7>uM olarak bulundu. Ferrislyanit için K,, değeri 13.?juM, NADH için K^ değeri U.JjaM olarak saptandı. Saflaştırılmış koyun akciğer redüktaz enziminin NADH-sitokrom ç redüktaz aktivitesini, koyun akciğer sitok-rom be varliSlttda gösterdiği bulundu. Ayrica.cysteine amino asitinin enzimin aktivitesi için gerekli olduğu gSst erildi. Anahtar kelimeleri NADH-sitokrom b~redu1ctaz enziminin saflaştırılması, koyun akciğer NADH-sitokrom be redûktaz enzimi, sitokrom b- elektron tasiyicl sistemi, akciğer sitokrom be redfiktas ene iminin karakterizasyonu. vi
Özet (Çeviri)
PURIFICATION AND SPECTRAL AND CATALYTIC CHARACTERIZATION OF NADH-CYTOCHROME b, REDUCTASE Güray, Tülin Institute of Natural and Applied Sciences Joint Graduate Program in Biochemistry, Ph.D. Thesis Supervisor! Prof.Dr. Emel Arınç 87 Pages, February 1989 ABSTRACT NADH- cytochrome b~ reductase (E.C. 1.6.2.2) was purified from sheep lung microsomes by column chromatography on first and second DEAE-cellulose and 5'-ADP-agarose, in the presence of detergents, cholate and Emulgen 91 3. The specific activity was 638 yuaoles ferri- cyanide reduced/min/mg protein and the yield was 6 % of the initial activity in microsomes. The SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of the purified lung reductase showed one protein band, having the apparent monomer molecular weight of 3^*500 + 1,500 and the active subunit molecular weight was found to be 68,500 by Sephadex G-200 column chromatography in the presence of 0.4 % deoxycholate. Trypsin treated reductase showed two extra protein bands of molecular weights of 28,000 and 25,000 on SDS-polyacrylamide gels. The purified enzyme was found to contain FAD as prosthetic group and characteristic FAD peaks were obtained in absorption spectrum. The optimum conditions for NADH-cytoehrome be and NADH-ferricyanide reductions were examined. The KB values obtained for sheep lung reductase in 0.1M phosphate buffer, pH 7.5. at 25°C were KANASI!)-*. 3 /«. KB(ferrlcyanide)-13.7/iM| and for cytochrome b^ reduction KM values of 7.7juK (NADH) and 1^ (Cyt.be)" ili0.167 juM were obtained in 0.1M phosphate buffer, pH 6,8, at 25 C. Kinetic analysis of the purified sheep lung reductase revealed that reduction was operated through a ping-pong mechanism. Lung reductase was found to be reconstitute JfADH-cytochrome c reductase activity via sheep lung cytochrome be* Also, cysteine was shown to be the essential anlnoacid for the full activity of the enzyme. Key words t purification of NADH-cytochrome be reductase, sheep lung NADH- cytochrome be reductase, cytochrome be electron trans- port system, lung cytochrome b- reductase characterization. lv
Benzer Tezler
- Domuz ciğeri ve bezelye tohumundan diamin enziminin izolasyonu saflaştırılması ve özelliklerinin incelenmesi
The Isolation of DAO from pig liver and pea seedling and purification and specification
YÜKSEL GÜVENİLİR(AVCIBAŞI)
- Taç eter sübstitüe yeni ftalosiyoninlerin siklik voltametri ile incelenmesi
Başlık çevirisi yok
DİLEK COŞKUNER
- Taç eter substitue yeni ftalosiyaninler
Novel phthalocyanines with crown ether substituents
EMEL MUSLUOĞLU
- Roka (Eruca sativa) bitkisinden katalaz enziminin saflaştırılması
Purification of catalase from rocket (Eruca sativa)
AYŞE DİNÇER
