Nevşehir Kozaklı kaplıcalarından izole edilen termofilik bakterilerin izolasyonu, identifikasyonu, Bacillus licheniformis SO7'den α-amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Isolation, identification of thermophilic bacteria isolated from thermal springs of nevşehir-kozakli, purification and characterization of α-amylase enzyme from Bacillus licheniformis SO7
- Tez No: 483588
- Danışmanlar: DOÇ. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoteknoloji, Microbiology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu tez çalışması kapsamında; Nevşehir-Kozaklı Kaplıcasından alınan su örneklerinden termofilik bakterilerin izolasyonu ve moleküler karakterizasyonu gerçekleştirildi. Yapılan bu çalışma sonucunda izolatların %99 oranında Bacillus licheniformis ve B. paralicheniformis'e benzerlik gösterdiği tespit edildi. Bu izolatlardan petri denemeleri sonucunda en yüksek amilaz aktivitesi veren B. licheniformis SO7 suşu seçilerek, bu izolattan ekstraselüler α-amilaz enzimi nişasta afinite metoduyla tek basamakta saflaştırıldı ve biyokimyasal yolla karakterize edildi. %28,65 verimle 1,95 kat saflaştırılan enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE jel elektroforez yöntemiyle yaklaşık 83,17 kDa olarak hesaplandı. α-amilaz enzimi için optimum pH 7,0 ve optimum sıcaklık 90°C olarak belirlendi. Amilaz enziminin geniş alkali pH aralığında (pH 7,0-11,0) stabil kaldığı görüldü. Enzimin 80°C gibi yüksek bir sıcaklıkta 120 dk sonunda aktivitesinin yaklaşık olarak %80'ini koruduğu tespit edildi. B. licheniformis SO7 α-amilaz enziminin Tween-20 ve Triton X-100 gibi bazı yüzey aktif maddeleri varlığında amilolitik aktivitesinin arttığı belirlendi. Organik çözücülere karşı yüksek bir stabilite gösteren enzimin %30 aseton varlığında aktivitesinin %73'ünü koruduğu görüldü. K+ iyonunun enzimin aktivitesini arttırdığı, EDTA varlığında ise enzim stabilitesinin %86 oranında korunduğu belirlendi. Ayrıca CaCI2 bileşiğinin α-amilaz enzim aktivitesini arttırdığı tespit edildi. α-amilaz enzimi için en yüksek substrat spesifitesi pirinç nişastası olarak saptandı. B.licheniformis SO7 α-amilaz enzimi için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 3,24 mg/mL ve 204,08 mmol.mL-1.dk-1olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
As part of this thesis research; Isolation and molecular characterization of thermophilic bacteria was performed on the water samples taken from the thermal water sources of Nevşehir-Kozaklı. As a result of this study, it was detected that the isolates had a similarity to Bacillus licheniformis and B. paralicheniformis at a rate of 99%. B. licheniformis SO7 strain which gives the highest amylase activity as a result of the petri dishes from these isolates was selected, extracellular α-amylase enzyme from these isolates was purified in one step by using starch affinity method and characterized biochemically. The molecular weight of the enzyme purified 1,95 fold with 28,65% efficiency was found to be about 83,17 kDa by using SDS-PAGE gel electrophoresis method. For the α-amylase enzyme it was determined that; the optimum pH was 7,0 and the optimum temperature was 90°C. The amylase enzyme seemed to be stable in the broad alkaline pH range (pH 7,0-11,0). It has been found that the enzyme protects approximately 80% of its activity after 120 min at temperature of 80°C. It has been determined that amylolytic activity of B. licheniformis SO7 α-amylase enzyme increased in the presence of some surfactants such as Tween-20 and Triton X-100. The enzyme, which exhibits a high stability towards organic solvents, was found to retain 73% of its activity in the presence of 30% acetone. It was determined that K+ ion increased the activity and in the presence of EDTA the enzyme stability was protected at 86%. In addition, it was identified that the CaCI2 compound increased the α-amylase enzyme activity. The highest substrate specificity for the α-amylase enzyme was determined as rice starch. The KM and Vmax values for B. licheniformis SO7 α-amylase enzyme were respectively found to be 3,24 mg / mL and 204,08 mmol.mL-1 min-1.
Benzer Tezler
- Nevşehir-Kozaklı yöresinde yetiştirilen şekerpancarının (Beta vulgaris L.) bor statüsü
Boron status of sugar beet (Beta vulgaris L.) grown in Nevşehir-Kozaklı district
ÖZGÜR SARIASLAN
- Kozaklı (Nevşehir) jeotermal alanının su kimyası ve rezervuar sıcaklığının incelenmesi
Başlık çevirisi yok
ALİ KOÇAK
Doktora
Türkçe
1997
Jeoloji MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiJeoloji (hidrejeoloji) Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLTEKİN GÜNAY
- Nevşehir'in Kozaklı ilçesinde ad verme geleneği
Giving name tradition has been started in Nevşehir Kozaklı
HİLAL DEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
Türk Dili ve EdebiyatıGazi ÜniversitesiTürk Edebiyatı Bölümü
DOÇ. DR. ALİ YAKICI
- Nevşehir ili Kozaklı ilçesindeki sağlık turizmi potansiyeli ve bu potansiyeli artırabilmek için yapılabilecekler
The current health tourism potential in Kozakli and things that need to be done to improve this potential
SİBEL KABUKCUOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
TurizmBeykent Üniversitesiİşletme Yönetimi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. TALAT FIRLAR
- Nevşehir ili Kozaklı ilçesinin tarihi ve sosyo-ekonomik kültürel yapısı
Nevşehir province of Kozaklı district cultural history and socio-economic structure
TUĞRUL MERT