Midye (Mytilus galloprovincialis LAM.) hemolenfinden asetilkolinesteraz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of acethylcholinesterase from the haemolymph of the mollusc (Mytilus galloprovincialis Lam.) and investigation of its kinetic properites
- Tez No: 482877
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NURTEN ÖZSOY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Asetilkolinesteraz, Enzim saflaştırması, Enzimler, Hemolenf, Kinetik, Midyeler, Mytilus galloprovincialis, Acetylcholinesterase, Enzyme purification, Enzymes, Haemolymph, Kinetics, Mussels, Mytilus galloprovincialis
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Asetilkolin aracılı sinir iletiminde asetilkolinesteraz enziminin rolü yoğun araştırma konusu olmaktadır. Bu çalışmada Mytilus galloprovincialis'den elde edilen hemolenf sıvısından amonyum sülfat çöktürme ve edrofonyum-Sefaroz 6B afinite kromatografisi yöntemleri kullanılarak AChE enzimi 13 kez ve % 3 verimle saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin molekül ağırlığı denatürasyon ve indirgeme koşullarında yapılan SDS poliakrilamid jel elektroforezinde 51000 daltonluk olarak belirlendi. Yapılan çalışma sonucunda saflaştırılan enzimin spesifik aktivitesi 3 U/mg protein olarak hesaplandı. Enzimin optimum pH'sının 7,5 olduğu belirlendi, en yüksek aktivitesini ise 35oC'de gösterdiği görüldü. Enzimin asetiltiyokolin iyodüre karşı gösterdiği Km (Michaelis sabitesi) değerinin ve en yüksek reaksiyon hızının sırasıyla 1,3 mM ve 0,188 mM/mg/dk olduğu bulundu. Bu çalışmada üç metoksiflavon bileşiğinin AChE'ı inhibe edici etkileri incelendi. IC50 değerleri 0,033 0,005, 0,019 0,002 ve 0,016 0,003 mg/ml olan hispidulin (4',5,7-trihidroksi-6-metoksiflavon), 5-hidroksi,6,7,8'4'-tetrametoksiflavon ve gnafalin (5,7-dihidroksi-3,8-dimetoksiflavon)'in AChE'I güçlü inhibe edici etkiye sahip oldukları saptandı. Hispidulin, 5-hidroksi-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon ve gnafalin'in Ki (inhibisyon sabiteleri) sırasıyla 3,6x10-2, 10-2 ve 9,4x10-3 mg/ml olarak bulundu. 5-hidroksi-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon'un kompetitif, hispidulinin ve gnafalinin ise ankompetitif inhibtör olarak etki ettiği görüldü. 5-hidroksi-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon geri dönüşümlü olarak AChE'ı inhibe ettiği için, klinik çalışmalarda potansiyel bir ilaç adayı olabileceği sonucuna varıldı.
Özet (Çeviri)
The role of acetylcholinesterase in terminating acetylcholine-mediated neurotransmission made it the focus of intense research. In this study the haemolymph AChE from the molusc Mytilus galloprovincialis was purified to homogeneity by (NH4)2SO4 fractional precipitation and affinity chromatography on edrophonium-Sepharose 6B. The enzyme was purified approximatedly 13 fold over the crude extract and was obtained in 3 % yield. The molecule weight of the purified enzyme was calculated as 51000 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis under denaturing and reducing conditions. The specific activity of purified enzyme was 3 U/mg protein. The purified enzyme had an optimum pH of 7.5 and showed optimal activity at 35oC. Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum velocity of enzyme) for acetylthiocholine iodide were 1.3 mM and 0.188 mM/mg/min, respectively. The inhibition of purified AChE by three methoxyflavones was investigated. Hispidulin (4',5,7-trihidroxy-6-metoxyflavon), 5-hidroxy-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon and gnaphalin (5,7-dihidroxy-3,8-dimetoxyflavon) were found to have the strong inhibitory effect on AChE with IC50 values of 0,033 0,005, 0,019 0.002 and 0.016 0.003 mg/ml, respectively. Ki (inhibition constant) for hispidulin, 5-OH,6,7,8'4'-tetrametoksiflavon and gnaphalin were found to be 3.6x10-2, 10-2 ve 9.4x10-3 mg/ml, respectively. 5-hidroxy-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon was determined as competitive inhibitor, while hispidulin and gnaphalin were determined as uncompetitive inhibitors. It was concluded that 5-hidroxy-6,7,8'4'-tetrametoksiflavon, which inhibited reversibly AChE might be use as potential drug for clinical use.
Benzer Tezler
- Midye (Mytilus Galloprovincialis Lam.) hepatopankreas beta-D-galaktozidaz izoenzimlerinin kısmen saflaştırılması
Partial purification of mytilus galloprovincialis lam. hepatopancreas beta-D-galaktosidase
FATMA CEREN DİKMEN
- Midye (Mytilus galloprovincialis lam.) manto dokusundan aspartat aminotransferazın saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and some properties of aspartate aminotransferase from the mantle tissue of Mytilus galloprovincialis lam.
ÖZLEM DÖNMEZ
- Midye (Mytilus galloprovincialis Lam.) hepatopankreasından tiyoredoksin redüktaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of thioredoxin reductase from the hepatopancreas of the mollusc (Mytilus galloprovincialis Lam.) and investigation of its kinetic properites
ESRA ACAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Biyokimyaİstanbul ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NURTEN ÖZSOY
- Akdeniz midyesi'nin (Mytilus galloprovincialis, Lam., 1819) Doğu Karadeniz'de yetiştiricilik potansiyelinin irdelenmesi: Larva yerleşimi ve büyüme özellikleri
Studing of mediterrian mussıl's (Mytilus galloprovincialis, Lam., 1819) culture potential in the East Black Sea: Spat settlement and growth characteristics
ŞEBNEM ATASARAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
Balıkçılık TeknolojisiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBalıkçılık Teknolojisi Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM OKUMUŞ
- Akdeniz midyesi (Mytilus galloprovincialis, Lam., 1819) populasyonlarının genetik yapısının belirlenmesi
Determination of genetic structure of mediterranean mussels (Mytilus galloprovincialis, L., 1819) populations
ŞEBNEM ATASARAL ŞAHİN
Doktora
İngilizce
2011
Balıkçılık TeknolojisiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBalıkçılık Teknolojisi Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLHAN ALTINOK