Geri Dön

Hipoksik ve normoksik ortam şartlarında osteojenik nesile farklılaştırılmış insan adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerin gen/mikrorna ifade profillerinin karşılaştırmalı analizi

Comparative evaluation of the gene/microrna expression profiles of hypoxic and normoxic conditions on the osteogenic differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells

PDF İndir

  1. Tez No: 443935
  2. Yazar: OYA ÇELİKAĞ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE ESER ELÇİN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Gen ifadesi, Hipoksi, Hücre kültürü, Kök hücreler, Mikro RNA, RNA, Gene expression, Hypoxia, Cell culture, Stem cells, Micro RNA, RNA
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kök Hücre ve Yenileyici Tıp Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Hücresel tedaviler kapsamında, kök hücrelerin in vitro çoğaltılma ve farklılaştırma işlemlerinin gerçekleştirildiği ortamın oksijen düzeyine bağlı olarak, hücre çoğalma dinamiğinde, elde edilen hücresel ürünün özelliklerinde ve transplantasyon sonrası etkinlik düzeyi bakımından farklı sonuçlara ulaşıldığı rapor edilmektedir. Sunulan tez çalışmasında hipoksik ve normoksik şartlar altında karşılaştırmalı olarak insan yağ doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin karakteristik özellikleri ve osteojenik nesile farklılaşma potansiyellerinin incelenmesi amaçlanmıştır.Yapılan çalışmada insan yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücreler hem normoksik (%20 O2) hem de hipoksik (%2 O2) ortam koşullarında kültüre edildi. Kültüre edilen hücrelerin mezenkimal kök hücre karakteri taşıdığı akım sitometri bulguları, soy analizi ve mikroskop görüntüleri ile gösterildi. Hücreler %70-80 bolluğa ulaştıklarında osteojenik farklılaştırma besiyerine geçildi. Osteojenik farklılaşma alkalin fosfataz aktivesi (ALP) ve Ca+2 tayini, immunohistokimya (OSC, BSP) ve histokimya (von Kossa, Alizarin kırmızısı) boyamaları ile tespit edildi. Belirlenen zaman noktalarında (7., 14., 21., 28. gün) hücre kültürlerinden total RNA izolasyonu gerçekleştirildi. RNA izolasyonundan sonra cDNA sentezi yapılarak hücrelerin miRNA ekspresyon seviyeleri RT-PCR kullanılarak analiz edildi.Çalışma sonucunda kültüre edilen hücrelerin hem hipoksik hem de normoksik ortam şartlarında mezenkimal kök hücre karakteri taşıdığı yapılan analizler ile gösterildi. Yapılan osteojenik farklılaşma sonucunda her iki ortamda histokimya ve immunohistokimya boyamaları pozitif olarak görülse de hipoksik ortamda günlere bağlı olarak bir azalma gözlenmiştir. Hücrelerde her iki ortamda da ALP aktivitesi 14.günden sonra düşmüştür. Ca+2 analizi sonucunda da 7.günden itibaren bir düşüş gözlenmiştir. Belirlenen zaman noktalarında gerçekleştirilen RNA izolasyonunda, RNA miktarlarının ve saflığının çalışma için yeterli olduğu görülmüştür. Yapılan miRNA analizi sonucunda miR106, miR148b, miR26a ve miR22 ekspresyonlarının hipoksik koşullarda arttığı gözlenmiştir. Sonuç olarak hipoksik ortamda miRNA ekspresyonunundaki artışın osteojenik farklılaşmayı baskıladığı düşünülebilir.

Özet (Çeviri)

For cellular therapies, the oxygen concentration of the medium used for the expansion and differentiation of stem cells, affects the dynamics of cell proliferation, the properties of the cell products and the post-transplant effectiveness of grafted cells. In this study, we have investigated the effects of normoxic and hypoxic conditions on the osteogenic differentiation potential of the adipose-derived stem cells.Human adipose-derived mesenchymal stem cells were cultured in normoxic (20%) and hypoxic (2%) conditions. The mesenchymal properties of the cultured cells were confirmed using flow cytometry, lineage analysis and imaging techniques. Upon 70-80% of confluence, the medium was switched to osteogenic. Osteogenic differentiation was documented by measuring the alkaline phosphatase activity (ALP) and Ca+2 assay, histochemistry (von Kossa, Alizarin Red) and immunohistochemistry (OCN, BSP). Total RNA isolation was performed at previously set time-points (7th, 14th, 21th, 28th days). Upon cDNA synthesis miRNA levels were detected the using RT-PCR technique.Final analyses confirmed that the cells displayed mesencymal stem cell characteristics in both hypoxic and normoxic conditions. Following osteogenic differentiation, histochemical and immunohistochemical stainings were positive for both groups, however hypoxia group showed a decreased differentiation capacity through the time-points. ALP activity was decreased for both groups at day 14. Ca+2 assay results was similarly lower at day seven for both groups. RNA isolation performed at pre-designated time-points has proven that the amount and purity of RNA was optimal. miRNA analyses have shown that the expression levels of miR106, miR148b, miR26a and miR22 has increased under hypoxic conditions. This study confirms that the measured expression of miRNA suppresses osteogenic differentiation capacity in adipose-derived mesenchymal cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    817610

    Investigation of the effects of supplementary therapy candidate molecules in breaking chemotherapy resistance in glioblastoma cells and retrospectively supporting the findings with primary tumors

    Glioblastoma hücrelerinde kemoterapi direncinin kırılmasında tamamlayıcı tedavi adayı moleküllerin etkilerinin araştırılarak bulguların retrospektif olarak primer tümörler ile desteklenmesi

    SENA FERAH

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Tıbbi BiyolojiBursa Uludağ Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BERRİN TUNCA

  2. Tez No

    542484

    CUMULUS CELL IS A NEW CANDIDATE FOR CELL THERAPY

    HÜCRE TEDEVİSİNE YENİ BİR ADAY OLARAK KÜMÜLÜS HÜCRESİ

    ESLAM MOHAMMED

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyokimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BARBAROS NALBANTOĞLU

    PROF. DR. FİKRETTİN ŞAHİN

  3. Tez No

    765299

    Uzun süreli minosiklin uygulamasının ventilasyonun farklı şiddetlerdeki hipoksiye aklimatizasyonu oluşumuna etkisinin spinal kord(C3-C5) bölgesinde araştırılması

    Investigation of the effect of LONG-TERM minocyclin application on the formation of hipoxy acclimatization of ventilation in different violations in the spinal cord (C3-C5) region

    HALİME BÜŞRA BAĞLITAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    FizyolojiErciyes Üniversitesi

    Fizyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ KEMAL ERDEM BAŞARAN

  4. Tez No

    311604

    Aralıklı hipoksik antrenmanın elit sporcuların aerobik ve anaerobik performanslarına etkisi

    Effect of intermittent hypoxic training on aerobic and anaerobic performance of elite athletes

    ALİ EROĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    SporGata

    Spor Hekimliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TANER AYDIN

  5. Tez No

    428496

    Malign melanomda hipoksik süreç ve ilişkili genlerin araştırılması

    Analysis of hypoxic process and related genes in malignant melanoma.

    MUSTAFA EMRE ERCİN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Moleküler TıpKırıkkale Üniversitesi

    Patoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖNDER BOZDOĞAN

Geri Dön