Pankreas adacık kaynaklı MAFA+/PAX4+ kök hücrelerin kullanılmasıyla desellülerize karaciğer doku iskelesinin insülin salgılayan doku parçasına dönüştürülmesi
Development of decellularized liver scaffold into insulin secreting tissue BY MAFA+/PAX4+ pancreatic islet derived stem cells
- Tez No: 433367
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN DURUKSU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biyoloji, Biyomühendislik, Biotechnology, Biology, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Biyolojik dokular, Ekstrasellüler matriks, Endokrin bezler, Karaciğer, Karaciğer hastalıkları, Kök hücreler, Langerhans adacıkları, Pankreas, İnsülin, Biological tissues, Extracellular matrix, Endocrine glands, Liver, Liver diseases, Stem cells, Islets of langerhans, Pancreas, Insulin
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
AMAÇ: Sunulan tez çalışmasında sıçan karaciğerlerinin desellülarizasyonuyla elde edilen karaciğer doku iskelesinin Pax4 (paired box gene 4) ve MafA (musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) genleri aktarılmış sıçan pankreatik adacık kaynaklı mezenkimal kök hücreler (MafA+/Pax4+-sPA-MKH) ile resellülarizasyonu sonucu endokrin pankreas işlevine sahip doku üretimi amaçlanmıştır. YÖNTEM: Çeşitli deterjan serileri kullanılarak karaciğer hücrelerinden arındırılmıştır. Böylece doku ve organları oluşturmak için üzerinde hücrelerin tutunup çoğalmalarına olanak tanıyan 3 boyutlu doku iskelesi elde edilmiştir. Bu biyolojik materyalde hücresel bileşenlerin kalmadığı moleküler, histokimyasal ve immün floresan tekniklerle gösterilmiştir. Kültürde çoğaltılan MafA+/Pax4+-sPA-MKH'ler doku iskelesine ekilerek yeni bir kültür ortamına alınmışlar ve buraya tutunup çoğalmaları sağlanmıştır. Hücreler doku iskelesine ekildikten sonra standart besi yeri ile kültüre alındıklarında yalnızca matriksin farklılaştırma etkisi, endokrin farklılaştırma besi yeri ile kültüre alındıklarında da matriks etkisine ilaveten kimyasal uyarının etkisi birlikte incelenmiştir. Doku iskelesindeki hücrelerin pankreatik adacıklarda bulunan hücrelere farklılaşmalarını değerlendirmek için çeşitli belirteçler incelenmiştir. Bu inceleme immün floresan yöntemlerle boyanarak, Real Time PCR ile gen ekspresyon seviyesinde, ELISA kullanılarak protein seviyesinde yapılmıştır. Elde edilen sonuçlar 2 boyutlu standart ve endokrin farklılaştırma besi yeri içeren kültürler ve pankreatik adacıklar ile karşılaştırılarak yöntemin etkinliği incelenmiştir. BULGULAR: Elde edilen sonuçlar desellülarizasyonun başarılı bir şekilde gerçekleştiğini göstermektedir. Karaciğer doku iskelesinin hücrelerin çoğalmalarını engellemediğini ve hücre bölünmelerinin devam etiği görülmüştür. Matriks içinde kültüre alınan hücrelerin 2 boyutlu hücre kültürü ile kıyaslandığında insülin gen ekspresyonunda ve insülin üretiminde çok daha verimli olduğu gözlemlenmiştir. SONUÇ: Hücresizleştirilen karaciğer doku iskelesinde hücresel herhangi bir bileşenin kalmadığı gösterilmiştir. Bu doku iskelesinin MafA+/Pax4+sPA-MKH'ler ile yeniden hücrelendirilmesi aşamasında ise hücrelerin matrikse tutunduğu ve bölünüp çoğaldıkları, matriksin etkisi ve endokrin yönde kimyasal uyarılma aşaması ile endokrin pankreas dokusuna benzer karakteristik özellikler gösteren bir yapıya büründükleri gözlemlenmiştir.
Özet (Çeviri)
OBJECTİVE: In the proposed thesis study, it was aimed the production of tissue with endocrine pancreatic function by the recellularization of decellularized rat liver tissue scaffold with Pax4 ( paired box gene 4) and MafA ( musculoponeurotic fibrosarcome oncogene homolog A) transfected pancreatic islet derived mesenchymal stem cells (MafA+/Pax4+-PA-MKH). METHOD: By a serie of detergent applications, liver was removed from the cells. In this way, 3D tissue scaffold were derived supporting the cell adhesion and proliferation to generate tissue and organ structures. By molecular, histochemical and immunofluorescence techniques, the remnant of cellular component, including nucleic acids, was shown in this biological material. The cultured MafA+/Pax4+-sPA-MSCs was seeded onto the tissue scaffold, and cell adhesion and proliferation was provided. Following the recellularization, the effect of matrix was analyzed by culturing the cells in the standard culture medium, and the effect of chemical signalling beside the matrix was evaluated by culturing the cells in the endocrine differentiation medium. Various markers were analyzed for the evaluation of cell differention in the tissue scaffold into the pancreatic islet cells. These analyses were performed at protein level by immunoflourescence and ELISA methods and at gene level by Real-Time PCR method. The efficacy of this method was evaluated by comparing the observations to the 2D cultures supplemented with standard and endocrine differentiation medium, as well as with rat pancreatic islet cells. RESULTS: These results of study shows that decellularization was successfully completed. The capability of liver tissue scafold in supporting maintenance and expansion of cells were determined. In terms of insulin expressions and productions, 3D culture was much more efficient compared to 2D. CONCLUSİONS: İt was demonstrated that none of the cellular components were presented in the tissue scaffold of decellularized liver. At the recellularization stage of this scaffold with MafA+/Pax4+-sPA-MSCs, the adhessione and proliferation of the cells were observed under the influence of the matrix and chemical induction of differentiation into endocrine cells.
Benzer Tezler
- Tip 1 dm ratlarda adacık hücre nakli ile eşzamanlı olarak pankreas kaynaklımezenkimal kök hücre naklinin tedavi ediciözelliklerinin karşılaştırılması
Comparison of therapeutic characteristics of islet celltransplantation simultaneous with pancreatic mesenchymalstem cell transplantation in rats with type 1 diabetes mellitus
İLKNUR ÖZTÜRK ÜNSAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıSağlık BakanlığıEndokrinoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TUNCAY DELİBAŞI
- Kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücre tabakası ile birlikte 3-boyutlu adacık dokusunun subkutan naklinin diyabetik sıçan modelinde etkinliğinin araştırılması
Studying the efficiency of subcutaneous transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cell sheet with 3-D islet tissue in diabetic rat model
BÜŞRA ÖNCEL DUMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyomühendislikKocaeli ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AYLA EKER SARIBOYACI
- İndüklenerek adacık benzeri hücre kümeleşmeleri (AHK) oluşturan PANC1 hücre hattında sekretogranin (SCG2) gen anlatımının gösterilmesi
Revealing secretogranine (SCG2) gene expression in PANC1 cell line that forms islet like cell aggregates (ISA) by induction
ASLIHAN KAYGUSUZ
- Maternal obezite kaynaklı diyabetik yatkınlık için yeni bir marker: Amilin
A new marker for diabetic predisposition due to maternal obesity: Amylin
ÇAĞATAY OZAN KARABULUT
- Renal iskemi-reperfüzyon modeli oluşturulan sıçanlarda ellajik asidin pankreas ve böbrek üzerindeki etkileri
The effects of ellagic acid on pancreas and kidney in a rat model of renal ischemia-reperfusion
ERCAN ÖNDER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2026
Genel CerrahiBezm-İ Alem Vakıf ÜniversitesiGenel Cerrahi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADEM AKÇAKAYA