Mikrobiyal kökenli proteaz üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
The production, prufication and characterization of microbial orginated protease
- Tez No: 411280
- Danışmanlar: DOÇ. DR. BİLGE HİLAL ÇADIRCI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biyomühendislik, Biyokimya, Biotechnology, Bioengineering, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada proteaz üreticisi mikroorganizmalar topraktan izole edilmiş ve kalitatif olarak en yüksek proteolitik aktivite gösterdiği belirlenen suş, 16S rRNA dizi analizi ile Bacillus sp. olarak tanılanmış ve Bacillus sp. MT01 olarak adlandırılmıştır. Ekstraselüler olarak üretilen proteaz enzimi gradient (NH4)2SO4 çöktürmesi yöntemiyle %42.72 verimde 1,12 kat kısmi olarak saflaştırılmıştır. Sonrasında Sephacryl S-200 jel filtrasyon kromotografisi ve daha sonra DEAE Sepharose iyon değişim kromotografisi ile % 0.27 verimde 0,26 kat saflaştırılmıştır. Enziminin molekül kütlesi SDS-PAGE ile 32 kDa olarak tespit edilmiştir. Enziminin optimum reaksiyon sıcaklığı ve pH'sı sırasıyla 50 oC ve pH 7.5 olarak bulunmuştur. Proteaz enzimi 30oC'de 36 saat boyunca aktivitesinin %53'ünü koruduğu görülmlüştür. Enzim aktivitesi üzerine metal iyonlarının etkisi incelendiğinde, Fe+2, Na+1, Ca+2, Mn+2, Zn+2, Co+2 ve Mg+2 iyonlarının aktivatör etki gösterdiği, Cu+2 metal iyonunun ise inhibitör etki gösterdiği görülmüştür. Enzim aktivitesi üzerine organik çözücüler ve yüzey aktif maddelerin etkisi incelenmiş, Aseton, 2-Propanol ve Etil alkol varlığında sırasıyla aktivitede %46.6, 25.8 ve 17.8 oranında, DMSO, Toluen ve Benzen varlığında ise çok az aktivite kaybı gözlemlenmiştir. Artan H2O2 konsantrasyonu, proteolitik aktiviteyi artırırken, %1'lik Tween-80 ve Triton X-100 konsantrasyonu aktivite kaybına neden olmuştur. Enzim, kazein, BSA ve fibrinojen substratları arasından en yüksek aktiviteyi kazein substratı üzerinde göstermiştir. Enzim aktivitesi EDTA ile tamamen inhibe olurken, serin proteaz inhibitörü 5 mM PMSF ile %86,64 oranında inhibe olmuştur. Bu inhibisyon sonuçları enzimin metallo proteaz olduğunu düşündürmüştür. Enzimin Km ve Vm kinetik sabitleri ise sırasıyla 0.574 mg/ml ve 338.1234 µmol/ml dk şeklinde bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
In this study, protease producing microorganisms were isolated from soil and the strain which has the highest proteolytic activity by kalitative screening methods was identified as Bacillus sp. by 16S rRNA sequence analysis and called Bacillus sp. MT01. Extracellular protease was partially purified 1,12 fold by gradient (NH4)2SO4 precipitation method with 42.72 % efficiency. Protease was purified chromatographically 0,26 fold by Sephacryl S-200 gel filtration and then DEAE Sepharose ion exchange chromatography with a yield of 0.27%. The molecular mass of the enzyme was determined as 32 kDa by SDS-PAGE. Optimum reaction temperature and pH of the enzyme was found to be 50 ° C and pH 7.5, respectively. Protease enzyme showed its 53% of activity for 36 hours at 30 ° C. When the effect of metal ions on enzyme activity is analyzed, Fe + 2, N + 1, C +2, Mn +2, Zn +2, Co +2 and Mg +2 ions were detected as activators, and Cu+2 metal ions was observed as inhibitors. Effects of organic solvents and surfactants on enzyme activity were examined. In the presence of acetone, 2-propanol and ethanol, enzyme loses it activity by 46.6%, 25.8 % and 17.8 %, respectively. But, it is observed that precence of DMSO, toluene and benzene have very small activity lost. While the higher concentrations of H2O2 increased the activity Tween-80 and Triton X-100 has caused the loss of activity. Through the substrates like casein, BSA and fibrinogen, protease showed the highest activity against casein. While EDTA completely inhibits enzyme activity, the serine protease inhibitor PMSF inhibited the 86,64% of the activity. The results of this inhibition suggests that the Bacillus sp. MT01 protease is a metallo protease. The kinetic constants of the enzyme Km and Vm is measured as 0.574 mg/ml, 338.1234 µmol/ml.min, respectively.
Benzer Tezler
- Seçilen mantar izolatlarından proteaz enziminin izolasyonu, saflaştırılması ve fotostimülasyonu
Isolation, purification, and photostimulation of protease enzyme from selected fungal isolates
SUNDUS ATIYAH ABDULRRAZIQ BUZUWAYDAH
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
KimyaÇankırı Karatekin ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. VEYİS KARAKOÇ
- Makrofungus kökenli endüstriyel öneme sahip enzimler ve kullanım potansiyelleri
Industrially important enzymes of macrofungal origin and their application potentials
BAHAR GÜLCE KORKMAZ KAHVECİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
MikrobiyolojiEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NALAN YILMAZ SARIÖZLÜ
PROF. DR. HASAN HÜSEYİN DOĞAN
- Mezenkimal stromal hücrelerin crohn hastalığı modelinde inflamatuar ve proinflamatuar sitokinlere etkisi ve tedavide kullanımı
The effect of mesenchymal stromal cells to inflamatuar and proinflamatuar cytokines at crohn disease model and their role in therapy
İBRAHİM VOLKAN ŞENKAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
GastroenterolojiYeditepe Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CENGİZ PATA
- Denizel kökenli mikrobiyal suşlardan ürikaz terapötik enziminin üretimi ve karakterizasyonu
Production and characterization of uricase therapeutic enzyme from marine derived microbial strains
MERVE ARSLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiBiyomedikal Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF ESİN TUNA
- Denizel kökenli mikrobiyal suşlardan arginin deiminaz terapötik enziminin üretimi ve karakterizasyonu
Production and partial characterization of arginine deiminase therapeutic enzyme from marine microorganisms
NURŞAH UYSAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF ESİN HAMEŞ TUNA