TGF-β1 ile transfekte edilmiş pulpal kök hücre ve PRP uygulamasının kondrojenik diferensiasyon üzerine etkileri
Effects of TGF-β1 transfected pulpal stem cell and PRP application on chondrogenic differentiation
- Tez No: 408434
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NÜKHET KÜTÜK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Diş Hekimliği, Biyoloji, Biyoteknoloji, Dentistry, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Dental pulpa, Kök hücreler, Transfeksiyon, Transforme edici büyüme faktörleri, Transforme edici büyüme faktörü-beta, Trombositten zengin plazma, Dental pulp, Stem cells, Transfection, Transforming growth factors, Transforming growth factor-beta, Platelet rich plasma
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu çalışmanın amacı, TGF- β1 ve PRP' nin kök hücrelerin kondrogenezinde etkili bir kaynak olabileceği hipotezinden yola çıkılarak TGF-β1 geni ile transfekte edilmiş tavşan dental pulpa kök hücrelerinin ve normal/kondrojenik medyum üzerinde PRP uygulamasının kondrojenik farklılaşma üzerindeki etkilerini araştırmaktır. Gereç ve Yöntem: Tavşan diş pulpasından elde edilen MKH'ler akım sitometri, immün boyama, kantitatif Real Time PCR ve Farklılaşma testleri gibi analizlere tabi tutularak karakterize edildi. Hücreleri karakterize etmek için CD29, CD44 ve CD45 mezenkimal kök hücre belirteçleri kullanıldı. Çalışmamızda, tavşan diş pulpasından elde edilen kök hücrelere elektroporasyon yöntemi ile TGF-β1 geninin transfeksiyonu yapıldı. %10 konsantrasyonda inaktif PRP eklenmiş normal medyum, kondrojenik medyum ve normal+kondrojenik medyum ile oluşturulan deney gruplarında dental pulpa kök hücrelerinin kondrojenik farklılaşması incelendi. Deney grupları arasında kondrojenik farklılaşma açısından PCR verileri, transfeksiyon etkinliği ve hücre canlılığı istatistiksel olarak karşılaştırıldı. Bulgular: Dental pulpadan elde edilen kök hücrelerin CD29+, CD44+ ve CD45- oldukları akım sitometri, immünofloresan boyama, real time PCR ile tespit edildi. Ayrıca bu hücrelerin adipojenik ve osteojenik olarak farklılaştırıldıkları adipo red, alizarin red ve alkalen fosfataz pozitif boyanmaları ile gösterildi. TGF- β1 transfeksiyonu yapılan hücrelerde ve normal+kondrojenik medyuma PRP eklenen deney gruplarında SOX9, MM13, Aggrecan gen ekspresyonlarının çok erken günlerde arttığı ve kondrojenik farklılaşmada etkili olduğu tespit edildi. Deney gruplarında TGF- β1 transfekte hücreler ve PRP uygulanan hücrelerin safranin-O ve toludine blue ile ekstraselüler matrikslerinin pozitif boyandıkları tespit edildi. Gruplar arasında istatistiksel analizler sonucu anlamlı fark bulundu (p<0,05). Sonuç: Dental pulpa kaynaklı kök hücrelerin kondrogenezinde TGF- β1 gen transferi ile PRP uygulaması etkili bir kaynaktır ve kondrojenik farklılaşmayı artırmaktadır.
Özet (Çeviri)
Aim: The aim of this study was to evaluate the effects of normal and chondrogenic medium with PRP on chondrogenic differantiation of dental pulp stem cells (DPSCs) that are transfected with TGF-β1 gene, based on the hypothesis of TGF- β1 and PRP can be effective on the chondrogenesis of stem cells. Materials and Methods: MSCs that were derived from rabbit dental pulp were characterized by using flow cytometry, immunofleurosan staining, cantitative Real Time PCR, and differantiation tests. For the characterization, CD29, CD44 and CD45 mesenchymal cell markers were used. Stem cells from the rabbit dental pulp were transfected with TGF-β1 gene using electroporation technique. Chondrogenic differantiation of dental pulp stem cells were evaluated in experimental groups in which normal medium with 10% inactive PRP, chondrogenic medium, and normal+chondrogenic medium were used. PCR data, transfection efficiency, and cell viability of different groups were analyzed statistically. Results: CD29+,CD44+ ve CD45- dental pulp stem cells were confirmed by using flow cytometry, immunofleurosan staining, and cantitative Real Time PCR. Adipgenic and osteogenic differantiation of these cells were shown with adipo red, alizin red, and alkalyn phosphatase positive staining. The expression of SOX9, MM13 and Aggrecan genes increased earlier in TGF-β1 transfected cells, and in normal+chondrogenic medium with PRP, and these groups were effective in chondrogenic differantiation. The extracellular matrix of the cells which were transfected with TGF-β1, and which were subjected to PRP were positively stained with saphranin O and toluidine blue. Statistically significant difference was found between groups (p<0,05). Conclusion: TGF-β1 gene transfection and PRP can be effective in chondrogenesis of dental pulp stem cells, and can enhance chondrogenic differantiation.
Benzer Tezler
- İn vivo kıkırdak onarımı üzerine TGF-β1 transfekte edilmiş dental pulpa kaynaklı mezenkimal kök hücrenin etkisi
Effect of TGF- β1 transfected dental pulpa derived mesenshymal stem cells on in vivo cartilage regeneration
BETÜL TEKİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Histoloji ve EmbriyolojiErciyes ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SAİM ÖZDAMAR
- Kolon kanseri hücreleri üzerine timokinon ve 5-fluorouracilin terapotik etkisinin in vitro ve in vivo araştırılması
In vitro and in vivo investigation of the therapeutic effect of thymoquinone and 5-fluorouracil on colon cancer cells
ERAY METİN GÜLER
Doktora
Türkçe
2019
OnkolojiBezm-İ Alem Vakıf ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDÜRRAHİM KOÇYİĞİT
- Matriks metalloproteinaz 14 geninin TGF-β sitokini ile düzenlenmesi
Regulation of matrix metealloproteinase 14 gene by TGF-β cytokine
HANİFE AKTAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
GenetikBalıkesir ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SÜMEYYE AYDOGAN TÜRKOĞLU
DR. ÖĞR. ÜYESİ DERYA OKUYAN
- Hepatosellüler karsinomada kemik morfojenik protein 9 (BMP9)'un siRNA ile baskılanarak fonksiyonel analizi
Functional analysis of siRNA-mediated knock-down of bone morphogenetic protein 9 (BMP9) in hepatocellular carcinoma
TUĞÇE YAŞAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
GenetikTurgut Özal ÜniversitesiTıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÖMER FARUK HATİPOĞLU
- ADAMTS1 promotorunun SMAD aracılı regülasyonunun incelenmesi
An examination of SMAD-mediated regulation of ADAMTS1 promoter
FATMA POYRAZLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiBalıkesir ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SÜMEYYE AYDOGAN TÜRKOĞLU
PROF. DR. FERAY KÖÇKAR