Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması glutaraldehit ile immobilizasyonu ve bazı ağır metallere karşı ilgisinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase, immobilization with glutaraldehyde of lactoperoxidase and investigation of some heavy metals effects onto the enzyme affinity
- Tez No: 395610
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. SERAP UZUNOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada laktoperoksidaz enzimi afinite kromatografisi tekniğine göre Oktay Arslan tarafından sentezlenen CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-trozin-sülfanilamid kimyasal yapısına sahip afinite kolonu kullanılarak işlem görmemiş inek sütünden saflaştırılmış ve gluteraldehit ile immobilizasyonu sağlanmıştır. Amonyum sülfat çöktürmesi ve afinite kromatografisi ile saflaştırılan laktoperoksidaz enzimi % 28,69 verimle ve 407,94 saflaştırma derecesi ile elde edilmiştir. Enzimin saflığı SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiş ve 78 kDa civarında tek bant gözlenmiştir. Laktoperoksidaz enziminin kinetik sabitleri (KM ve Vmax ) 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin–6-Sülfonik asit) (ABTS) bileşiği substrat olarak kullanılarak belirlenmiştir ve Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilen KM ve Vmax değerleri sırasıyla 2x10-3M ve 5000 U/mldak olarak bulunmuştur. CoCl2, CuSO4, MgSO4, CdCl2, NiCl2, HgCl2, MnCl2, FeCl3, bileşikleri ile laktoperoksidaz enzimi üzerindeki in vitro etkileri araştırılmıştır. Çalışılan bileşiklerden inhibisyona neden olan bileşiklerin IC50 değerleri CoCl2 için 5,11 x10-4M, CuSO4 için 7,70x10-4M, CdCl2 için 4,63x10-4M, NiCl2 için 8,00 x10-4M, HgCl2 1,29 x10-4M ve FeCl3 5,08 x10-4M olarak bulunmuştur. Ayrıca MgSO4 ve MnCl2 bileşikleri laktoperoksidaz enziminin aktivitesini artırmışlardır. Enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 12 gluteraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. İmmobilize enzimin kinetik sabitleri, ABTS bileşiği substrat olarak kullanılarak Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilmiştir. KM ve Vmax değerleri sırasıyla 1,67x10-3 M ve 3333,33 U/mL.dak olarak bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
In this study, the enzyme Lactoperoxidase was purified by Sepharose-4B-L-tyrosine-sulfonamide. This gel synthesized by Arslan O. according to affinity chromatography technique. Lactoperoxidase was purified and immobilization on glutaraldehyde was investigated. Lactoperoxidase which was purified by ammonium sulfate precipitation and affinity chromatography was obtained with 28,69 % yield and 407,94 degree of purification. Purity of the enzyme was checked by SDS polyacrylamide gel electrophoresis and a single band was observed around 78 kDa. Lactoperoxidase enzyme kinetic constants (KM and Vmax) were determined by using 2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin–6-Sülfonik asit) (ABTS) compound as substrate. KM and Vmax values obtained from the Lineweaver-Burk graph were 2x10-3M and 5000 U/ml.min respectively. In vitro effects of CoCl2, CuSO4, MgSO4, CdCl2, NiCl2, HgCl2, MnCl2, FeCl3 compounds on xanthine oxidase enzyme were investigated and IC50 values were 5,11 x10-4M for CoCl2, 7,70x10-4M for CuSO4, 4,63x10-4M for CdCl2, 8,00 x10-4M for NiCl2, 1,29 x10-4M for HgCl2 and 5,08 x10-4M for FeCl3. In addition, MgSO4 and MnCl2 were increased the enzyme activity. The enzyme was immobilized on different percentages of glutaraldehyde and maximum enzyme activity of the immobilized enzyme was observed in the rate of 12 % glutaraldehyde. Immobilized enzyme's kinetic constants were obtained from Lineweaver-Burk graph using ABTS compound as substrate. KM and Vmax values were found 67x10-3 M and 3333,33 U / mL.min respectively.
Benzer Tezler
- Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı bileşiklerin bu enzim üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme and investigation effects of some compounds on this enzyme
BESTE ŞİPAL
Doktora
Türkçe
2016
BiyokimyaBalıkesir ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEMRA IŞIK
DOÇ. DR. SERAP BEYAZTAŞ UZUNOĞLU
- Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of lactoperoxdase enzyme from bovinemilk and investigation of some kinetics properties
İMDAT AYGÜL
- Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from bovine milk by affinity chromatography technique
ALİ ATASEVER
- Laktoperoksidaz enziminin kefirden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması ve bazı kimyasallar üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from kefir by affinity chromatography technique and investigation of its effects on some chemicals
ÖZLEM ALBAYRAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Eczacılık ve FarmakolojiSüleyman Demirel Üniversitesiİlaç Araştırma ve Geliştirme Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BAŞAK GÖKÇE
- Farklı memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, suda çözünen organik çözücülerdeki davranışı, sekonder ve tersiyer hidroperoksitleri indirgeme kinetiğinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase from different mammalians milk: Investigation of LPO behavior in water-misciple solvents and reduction kinetics of seconder and tertiary hydroperoxides
HALİL İBRAHİM HACIBEYOĞLU
Doktora
Türkçe
2002
KimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. HAMDULLAH KILIÇ