Pseudomanas aeruginosa ses-938-1 elastase : Isolation microbiological and biochemical characterizations
Pseudomanas aeruginosa ses 938-1 elastaz : izolasyonu mikrobiyolojik ve biyokimyasal karekterizasyonu
- Tez No: 35757
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEMRA KOCABIYIK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Bilim ve Teknoloji, Biyokimya, Science and Technology, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Elastaz, Pseudomonas aeruginosa, nötral metalo - proteaz, antibiyotik dirençliliği, Biyokimyasal analiz, Mikrobiyolojik analiz, Elastase, Pseudomonas aeruginosa, metallo - neutal proteinase, antibiotic resistance, Biochemical analysis, Microbiological analysis
- Yıl: 1994
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
oz PSEUDOMONAS AERUGINOSA SES - 938 - 1 ELASTAZ İZOLASYONU, MİKROBİYOLOJİK VE BİYOKİMYASAL KARAKTERİZASYONU ERGİN, Ezgi Yüksek Lisans Tezi, Biyoteknoloji Anabilim Dalı Tez Yöneticisi : Doç.Dr. Semra Kocabıyık Nisan, 1994,104 sayfa Elastaz P. aeruginosa tarafından üretilen birçok hücre dışı hastalık yapıcı faktörler arasında patojeniteden en çok sorumlu tutulanıdır. Pseudomonas elastazının ayrıca, bir dipeptit tatlandırıcı olan aspartamın sentezinde de etkin olabileceği bulunmuştur. Çok çeşitli kaynaklardan izole edilen P. aeruginosa suşlarının çoğu elastaz aktivitesine sahiptirler. Bu çalışmada, elastaz üretimi ile enzimin bazı biyokimyasal özellikleri incelenmiştir. Deneylerde, 28 P. aeruginosa susu arasında en yüksek elastaz aktivitesine sahip olan P. aeruginosa SES - 938 - 1 susu kullanılmıştır. Enzim çalışmalarında kullanılan elastaz preparasyonu, filtre edilmiş kültür süpernatantının, amonyum sülfat çöktürmesinden sonra bir“Centricon”ultrafiltrasyon aparatı kullanılarak tuzlardan arındırılması ve konsantre edilmesi sureti ile hazırlanmıştır. Aktiviteler, 36°C sıcaklıkta 100 mM TrisHCI, 10 mM CaCİ2 pH 7.5 tampon çözeltisinde ve substrat olarak N- succinyl-L-(ala)3-p-nitroanilid ' in varlığında ve 410 nm ' de absorbans okunarak ölçülmüştür.Elastaz aktivitesi 0.067 - 0.540 mM ' lık substrat konsantrasyonunda Michaelis - Menten Kinetiğine uymakta olup, görünür Km değeri 0.379 mM olarak bulunmuştur. Yüksek substrat konsantrasyonlarında ( > 0.500 mM ) inhibasyon görülmüştür. Optimum aktivite, 36°C sıcaklıkta ve pH 7.5 iken gözlenmiştir. Elastaz aktivitesi, EDTA ve EGTA gibi metal bağlayıcı ajanlar ve yüksek konsantrasyonlarda bazı metaller ( Mn2+, Ni2+, Zn2+ ) tarafından inhibe edilmiştir. Enzim, 36°C sıcaklıkta 90 dakika süre ile inkübe edildiğinde total aktivitesinin %90 ' ına sahip iken, 56°C sıcaklıkta 15 dakika inkübasyondan sonra hiçbir aktivite görülmemiştir. Elde edilen bu sonuçlara göre, P. aeruginosa SES - 938 - 1 elastazı bir nötral metalo - proteazdır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PSEUDOMONAS AERUGINOSA SES - 938 - 1 ELASTASE : ISOLATION, MICROBIOLOGICAL AND BIOCHEMICAL CHARACTERIZATIONS ERGİN,Ezgi M. S. in Biotechnology Supervisor : Assoc. Prof.Dr. Semra Kocabıyık April, 1994, 104 pages Among the numerous extracellular virulance factors produced by Pseudomonas aeruginosa, elastase is the one most often associated with pathogenesis. Pseudomonas elastase was also found to be efficient in synthesis of dipeptide sweetener, aspartame. Elastase activity is displayed by the majority of P. aeruginosa isolates from various sources. In this study, we have investigated characteristics of elastase production and some biochemical properties of the enzyme. In the experiments, Pseudomonas aeruginosa SES- 938-1 was employed which was shown to have the highest elastase activity of 28 P. aeruginosa strains examined. Crude elastase was prepared from filtered culture supernatant via salting out by ammonium sulphate, then desalting and concentrating the enzyme sample using a centricon microconcentrator. Activities were measured in 100 mM TrisHCI, 10 mM CaCİ2 ( pH 7.5 ) buffer at 36°C, using N-succinyl-L-(ala)3-p-nitroanilide as the substrate. The absorbancy was 111measured at 410 nm. The elastase activity followed Michaelis - Menten kinetics over the substrate range 0.067 - 0.540 mM with apparent KmaPP value of 0.379 mM. Inhibition was observed at higher concentrations ( > 0.500 mM ) of the substrate. Optimum activity was observed at 36°C and at pH 7.5. Elastase activity was inhibited by metal chelating agents ( EDTA and EGTA ) and at higher concentrations of Mn, Ni and Zn. Although the enzyme has retianed 90% of the total activity at 36°C after 90 min, no activity was detected at 56°C after 15 min. The results obtained suggest that P. aeruginosa SES-938-1 elastase is a neutral metallo-proteinase.
Benzer Tezler
- Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ve pseudomanas aeruginosa suşlarında beta-laktamaz aktivitesi ve çeşitli beta-laktam antibiyotiklerin bu suçlara etkisinin araştırılması
Beta-lactamase activity in ekcherichia coli, klebsiella pneumoniae, pseudomanas aeruginosa strains and the effect of various beta-lactam antibiotics on these strains
YILDIZ ERBAŞ (ATAR)
- Silikonlu ortamlarda mikroorganizmaların üreme durumları
Microorganisms colonization in silicon environment
ERGİN ER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2000
Göz HastalıklarıDokuz Eylül ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN KAYNAK
- 5-metil-2- (p-sübstitüebenzil) benzoksazol türevlerinin sentez, yapı aydınlatması ve mikrobiyolojik etkileri
The Synthesis, structure elucidation and antimicrobial activities of some 5-methyl-2-(p-substitutedbenzyl) benzoxazole derivaties
ÖZLEM TEMİZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1991
Eczacılık ve FarmakolojiAnkara ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ESİN ŞENER
- Bazı yeni N-(2-hidroksi-5-sübstitüefenil) benzenasetamid, fenoksiasetamid ve tiyofenoksiasetamid türevlerinin sentez, yapı aydınlatması, mikrobiyolojik etkilerinin saptanması ve olası metabolit etkinliklerinin araştırılması
Synthesis, structure elucidation, microbial activity and probable metabolic effects of some novel N-(2-hydroxy-5-substitutedphenyl) benzenacetamide, phenoxyacetamide and thiophenoxyacetamide derivatives
BEDİA KAYMAKÇIOĞLU KOÇYİĞİT
Yüksek Lisans
Türkçe
1996
Eczacılık ve FarmakolojiAnkara ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSMAİL YALÇIN
- 5-(2-furilkarboksamido)-,5-(2-tiyenilkarboksamido)-, 5-benzamido- ve 5-fenilasetamido-2-fenilbenzoksazol türevlerinin sentezi, yapılarının aydınlatılması, antimikrobiyal etkileri ve kantitatif yapı-etkileri analizi
Başlık çevirisi yok
ÖZLEM TEMİZ
Doktora
Türkçe
1998
Eczacılık ve FarmakolojiAnkara ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ESİN ŞENER