Lactate dehydrogenase release as a marker of cytotoxic response of e coli to H202
Hidrojen peroksitin E coli üzerindeki sitotoksit etkisinin belirtisi olarak lactate dehydrogenase enziminin salınımı
- Tez No: 35447
- Danışmanlar: DOÇ. DR. HÜVEYDA BAŞAĞA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Hidrojen piroksit, sitotoksisite, E.Coii, Radikal Tutucular, Laktat Dehydrogenaz, Hidrojen peroksit, Oksijen, Hydrogen peroxide, cytotoxicity, E.Coli. antioxidants, Lactate dehydrogenase, Oxygen
- Yıl: 1994
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
öz HİDROJEN PEROKSİTİN E.COLİ ÜZERİNDEKİ SİTOTOKSİT ETKİSİNİN BELİRTİSİ OLARAK LACTATE DEHYDROGENASE ENZİMİNİN SAL1N1Mİ JAMSHIDjAM.Donya Yüksek Lisans Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Hüveyda BAŞ AGA Eylül, 1994, 93 sayfa. Organizmaların yasam sırasında, reaktif oksijen türlerine, özellikle hidrojen peroksil'e maruz kalmaları kaçınılmazdır. Her ne kadar hücrelerin, maruz kalması dış etkenlerden olsa da, hücre kendi metabolizmasında, reaktif oksijen oluşturabilmektedir. Yani hücre sağlıklı koşullarda bazen oksijen radikalarını kendi yararı için oluşturup kullanmaktadır. Bu çalışma hidrojen peroksitin yüksek konsantrasyonundaki toksik etkisinin bilinmeyen yönlerini aydınlatmak amacıyla gerçekleştirilmiştir. Hücreleri, 5mM hidrojen peroksit konsantrasyonun da inkübe edildiğinde 120 dakika içerisinde hücrelerin %68'i yaşamasına vırağmen zaman içerisinde kendilerini yenilemeyi başarırlar bu sayı kontrolde %1 15'e yükselir. Aynı sonuç LDH aktivitesinin analizinde elde edilmiştir, buna göre enzim (hücre zarı zedelenmesinin bir belirtisi) ilk 60 dakikada çok fazla aktivite gösterir 3.17 (imole/ml/min (60 min) ama zaman içerisinde aktivitesi azalır, 0.053jımole/ mi/ min (120 min) buda hücrelerin artık ölmediği ve kendilerini koruduğunu gösterir. Mikroorganizma 20mM H2O2 inkübe edildiğinde hücreler ölmekte ve kendini yenilenemiyor (25% 120 dakda) buna göre ortama bırakılan enzim zaman içerisinde aktivitesinin giderek yükseldiği gözlenmiştir. (22.75 ^mole/ml/oıin 120 dak. içerisinde.) Ekponsensiyei fazda olan hücreler, 30 j M H2O2 ile inkübe edildikten sonra 20 mM H2O2 ilave edildiğinde, toksik etkisinin azaldığı görülmüştür. Antitoksidan maddelerin etkili olup olmadığını araştırmak üzere vitamin E (atocopherol), ve DMSO kullanılmıştır. Elde edilen neticelerden bu kimyasal maddelerin koruyucu etki göstermişlerdir ve hücre sayısında, buna bağlı olarak LDH aktivitesinde belirgin bir azalma gözlenmiştir. Şelat yapıcı maddelerden olan 2,2'-bipiridilde, 20 mM konsantrasyondaki H2O2 toksit etkiyi azalmıştır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT LACTATE DEHYDROGENASE RELEASE AS A MARKER OF CYTOTOXIC RESPONSE OF E.COLI TO H2O2 JAMSHIDJAM.Donya M.S. in Biochemistry Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Hüveyda BAŞA?A September İ994, 93 pages The exposure of living organism to reactive oxygen species, particularly hydrogen peroxide, is associated with aerobic life. It is true that the exposure comes. from, external sources but. it is also true that every cell can generate reactive oxygen species as well, therefore, our own metabolism produces free radicals even under healthy conditions, and these attacking species sometimes have useful effects. Because of its simple growth requirements, and the well- developed genetic UNA techniques that are available, are an excellent, model system for the study of oxidative stress. This study was conducted to understand the reason for the IVchanges in E.Coii ceils seen when exposed to high concentrations of H2O2. Analysis of the ability of these cells to form colonies has indicated a decrease in survival from 1 15% in untreated culture to 68% in the 120 minutes exposure to 5 mM H2O2 followed by a recovery in the number of cells capable of forming colonies. The same results were obtained when LDH activity was measured. Assay of lactate dehydrogenase activity in culture medium (as a marker for membrane damage) has revealed that a small amount of this enzyme was released from the ceils at early times (3.17 fimole/ml/min during the first 60 min.) but not after longer incubation periods (0.053 jtmole/ml/min after 120 min). Treatment with 20 mM H2O2 to 25% resulted in a decrease in survival and a significant release of lactate dehydrogenase; activity measured 2275 (tmole/ml/min in 120 minutes. Pretreatment of exponentially growing cells of EColi with 50 yM H2O2 reduced the toxicity of H2O2. DMSO and vitamin E (o> tocopherot) were used to test the effect of antioxidants on the cytotoxicity of H2O2. From the results obtained, these chemicals, increased the surviving fraction of the cells and decreased the activity of LDH. Metat-chelator 2-2' bipyridyle also protected RColi cells from H2O2 toxicity.
Benzer Tezler
- Deneysel sepsis modelinde Pentoksifillin'in myeloperoksidaz, nitrik oksid ve tümör nekroz faktör salınımı üzerine etkilerinin incelenmesi
The Effects of pentoxifylline on myeloperoxidase, nitric oxide and tumor necrosis factor release in experimental sepsis model
HİLAL ERSÖZ KOÇDOR
- Dansçı ayıların rehabilitasyonları sırasında kan parametrelerindeki değişiklikler
The Changes in blood parameters during the rehabilitation of dancing bears
NAZMİYE GÜNEŞ
- Çocukluk çağı idrar yolu enfeksyonlarında L.LDH (L.laktat dehidrogenaz) seviyesi ve önemi
The importance and level of L.LDH+ (L.lactate dehydrogenase) in childhood urinary tract infections
HATİCE DAK
- Amplification and isolation of a fragment of lactate dehydrogenase gene from rhizopus orgzae using RT_PCR
RT-PCR metodu kullanılarak rhizopus orgzae'dan lactat dehidrogenaz geninin bir parçasının amplifikasyonu ve izolasyonu
ERDOĞAN EŞREF HAKKI
Yüksek Lisans
İngilizce
1997
Bilim ve TeknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MAHİNUR S. AKKAYA
