İmmobilize metal afinite kromatografisi ile maya alkol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması
Purification of yeast alcohol dehyrogenase by immobilized metal affinity chromatography
- Tez No: 348558
- Danışmanlar: DOÇ. DR. DENİZ AKTAŞ UYGUN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biyoteknoloji, Biochemistry, Chemistry, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Alkol dehidrogenaz, maya, kriyojel, IMAK, iminodiasetik asit, Afinite kromatografisi, Alcoholdehydrogenase, yeast, cryogel, IMAC, iminodiaceticacid, Affinity chromatography
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İMMOBİLİZE METAL AFİNİTE KROMATOGRAFİSİ İLE MAYA ALKOL DEHİDROGENAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI Begüm AKDUMAN Yüksek Lisans Tezi, Kimya Anabilim Dalı Tez Danışmanı: Doç. Dr. Deniz AKTAŞ UYGUN 2013, 76 sayfa Bu tezde, poli(2-hidroksietil metakrilat-glisidilmetakrilat) [poli(HEMA-GMA)] kriyojelleri, HEMA ve fonksiyonel komonomer GMA?nın çapraz bağlayıcı olarak N,N'-metilen bisakrilamid (MBAAm) kullanılarak radikalik kriyokopolimerizasyon ile hazırlanmıştır. İminodiasedik asit (IDA) fonksiyonel grupları, poli(HEMA-GMA) kriyojellerindeki epoksi gruplarının halka yapılarının açılmasıyla kriyojellere bağlanmış ve daha sonra Zn2+ iyonları ile şelatlaştırılmıştır. Kriyojeller FTIR, SEM, EDX ve şişme çalışmaları ile karakterize edilmiştir. Bu kriyojeller 30-50 ?m büyüklüğünde birbirine bağlı gözeneklere sahiptir. Zn2+ ile şelatlaştırılmış poli(HEMA-GMA)-IDA kriyojellerinin denge şişme derecesi yaklaşık % 600?dür. Zn2+ ile şelatlaştırılmı şpoli(HEMA-GMA)-IDA kriyojelleri sulu çözeltiden alkol dehidrogenaz adsorpsiyonu için kullanılmış ve adsorpsiyon sürekli sistemde gerçekleştirilmiştir. Adsorpsiyona pH, alkol dehidrogenaz derişimi, sıcaklık, iyonik şiddet ve akış hızının etkisi araştırılmıştır. Maksimum alkol dehidrogenaz miktarı, 1,0 mg/mL alkol dehidrogenaz derişiminde ve 0,5 mL/dak akış hızındaki pH 5,0 asetat tamponunda 9,94 mg/g polimer olarak bulunmuştur. Adsorplanan alkol dehidrogenazın desorpsiyonupH 8,0 fosfat tamponunda 1,0 M NaCl içerisinde gerçekleştirilmiş ve % 93,5 olarak bulunmuştur. Ayrıca bu kriyojeller tek bir adımda mayadan alkol dehidrogenaz saflaştırılmasında kullanılmıştır. Desorbe edilen alkol dehidrogenazın saflığı gümüş ile boyanmış SDS-PAGE ile gösterilmiştir. Bu saflaştırma işlemi ham maya homojenatından alkol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması için başarılı bir şekilde kullanılabilir.
Özet (Çeviri)
PURIFICATION OF ALCOHOL DEHYDROGENASE BY IMMOBIKIZED METAL AFFINITY CHROMATOGRAPHY Begüm Akduman M. Sc. Thesis, Department of Chemistry Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Deniz AKTAŞ UYGUN 2013, 76 Pages In this thesis, poly(2-hydroxyethyl methacrylate-glycidyl methacrylate) [poly(HEMA-GMA)] cryogels were prepared by radical cryocopolymerization of HEMA with GMA as a fonctional comonomer and N,N'-methylene-bisacrylamide(MBAAm) as a crosslinker. Iminodiacetic acid (IDA) fonctional groups were attached via ring opening of the epoxy group on the poly(HEMA-GMA) cryogels and then Zn2+ ions were chealeted with this structures. Characterization of cryogels was performed by FTIR, SEM, EDX and swelling studies. These cryogels have interconnected pores of 30-50 µm size. The equilibrium swelling degree of Zn2+ chealeted poly(HEMA-GMA)-IDA cryogels was approximately 600%. Zn2+ chealeted poly(HEMA-GMA)-IDA cryogels were used in the adsorption of alcohol dehydrogenase from aqueous solutions and adsorption was performed in continuous system. The effects of pH, alcohol dehydrogenase concentration, temperature, ionic strengt hand flow rate on adsorption were investigated. The maximum amount of alcohol dehydrogenase adsorption wasd etermined to be 9,94 mg/g cryogel at 1,0 mg/mL alcohol dehyrogenase concentration and acetate buffer at pH 5,0 with flow rate of 0,5 mL/min. Desorption of adsorbed alcohol dehyrogenase was carried out by 1,0 M NaCI at pH 8,0 phosphate buffer and desorption rate was found to be 93,5 %. Additionally, these cryogels was used for purification of alcohol dehydrogenase from yeast with a single-step. The purity of desorbed alcohol dehydrogenase was shown by silver-stained SDS-PAGE. This purification process can successfully be used for the purification of alcohol dehydrogenase from unclarified yeast homogenates.
Benzer Tezler
- Cytochrome C purification with immobilized metal affinity chromatography (IMAC)
İmmobilize metal afinite kromatografisi (IMAC) ile sitokram C saflaştırılması
DENİZ TÜRKMEN
- Cu (II) incorporated magnetic metal complexing beads for human IgG separation in magnetically stabilized fluidized bed (MSFB) system
Manyetik olarak akışkanlaştırılmış yatak sisteminde insan immünoglobülin G ayrılması için Cu (II) takılı metal kompleksleştirici manyetik mikroküreler
MELİKE KARATAŞ
- The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli
Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu
NAZLI DİLARA ERDOĞDU
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Cloning and purification of biosynthetic enzymes
Biyosentetik enzimlerin klonlanması ve saflaştırılması
EBRU GÜRELME
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. NUR BAŞAK SÜRMELİ
DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI MOHAMED
- Construction and expression of a bi-functional peptide by using genetic engineering methods for bio-nanotechnologies
Biyo-nanoteknoloji için çift işlevli bir peptidin genetik mühendisliği yöntemleri ile oluşturulması ve üretilmesi
ABDULLAH SERT
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANDAN TAMERLER
YRD. DOÇ. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER