Pro-apoptotik ve anti-apoptotik proteinlerin EGCG ile tetiklenen apoptoz mekanizmasındaki rollerinin HCT-116 kolon kanser hücrelerinde incelenmesi
Investigation of pro-apoptoti?c and anti-apoptotic proteins in the apoptotic mechanism triggered by egcg in HCT-116 colon cancer cells
- Tez No: 331298
- Danışmanlar: PROF. DR. A.SEMRA KOÇTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: EGCG, Kolon kanseri, İntrinsik apoptoz, Ekstrinsik apoptoz, Apoptozis, Epigallokateşin, Epigallokateşin gallat, Kolon neoplazmları, Neoplazmlar, EGCG, Colon cancer, Intrinsic apoptosis, Extrinsic apoptosis, Apoptosis, Epigallokatechin, Epigallokatechin gallate, Colonic neoplasms, Neoplasms
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Yeşil çay ekstraktı olan EGCG kolay elde edilebilen, ucuz ve toksik olmayan katekin türevi bir polifenol bileşiğidir. Çeşitli kanser hücrelerinde programlı hücre ölümünü tetikleyebildiğinden kemoterapötik ajan olarak kullanımı yoğun olarak araştırılmaktadır. Buna rağmen EGCG'nin etkisi hücre tipine göre değişkenlik göstermektedir ve apoptoz mekanizması tam olarak aydınlatılamamıştır. Özellikle kolon karsinoma üzerinde gerçekleştirilen çalışmalar oldukça kısıtlıdır ve henüz EGCG'nin kolon kanserinde pro- ve anti-apoptotik genlerin ekspresyon profiline etkisini gösteren bir çalışma mevcut değildir. Bu bilgiler ışığında bu çalışmada, kolon karsinoma hücrelerinde apoptozu tetikleyen dozda EGCG'nin pro- ve anti-apoptotik genlerin ekspresyonlarına etkisi, artış gösteren ve apoptotik süreçte önemli rol oynayan proteinlerin mRNA düzeyinde susturulması ile bu proteinlerin apoptotik süreç açısından öneminin incelenmesi amaçlanmıştır. Bunun yanısıra EGCG'nin prooksidan özelliği ile hücrede oluşturduğu oksidatif etkinin hücre içi reaktif oksijen düzeyinin ölçülmesi ile incelenmesi amaçlanmıştır.Bu amaç doğrultusunda çalışmada HCT-116Bax+/+ ve HCT116Bax-/- insan kolorektal tümör hücre hatları kullanıldı. EGCG'nin hücre canlılığı üzerine etkisi MTT yöntemi ile, hücre ölüm tipi ve yüzdesi akış sitometrik analiz ile belirlendi. İntrensek ve ekstrinsik apoptotik yolakta görevli kazpazların protein ekspresyon değişimleri western-blot analizi ile incelendi. EGCG'nin pro- ve anti-apoptotik gen ekspresyon düzeylerine etkisi Real-Time PZR yöntemi ile belirlendi. İntrensek ve ekstrinsik apoptoz yolaklarının başlatıcı kaspazları olan kaspaz-8 ve kaspaz-9 genleri susturulmak üzere seçildi ve EGCG'nin etkinliğinde kaspaz-8 ve -9'un önemi incelendi. EGCG'nin hücrede oluşturduğu oksidatif etki oluşan reaktif oksijen türevlerinin akış sitometrik analizi ile saptandı.Elde edilen gen ve protein ekspresyon analiz verileri değerlendirildiğinde EGCG'nin apoptotik etkisini ağırlıklı olarak kaspaz 8 enzim aracılı ekstrinsik yolak ile gösterdiği ancak kaspaz 9 enzim aracılı intrinsik yolağın dolaylı olarak apoptotik etkiyi güçlendirdiği ve etkide EGCG'nin oluşturduğu hücre içi ROT'ların da etkin olduğu öngörülmektedir.
Özet (Çeviri)
EGCG, a catechin derivative polyphenol, exist in green tea, is easy-to-handle and non-toxic. Its potential chemoteraputic usage is studied recently because it is ability to trigger programmed-cell death. However, its effect may change according to cell type and apoptotic mechanism has not been explained yet. Especially, the sudies on colon carcinoma are limited and any study about the effect of EGCG on pro-and apoptotic gene expression profile does not exist yet. According to this information, in this study, it is aimed to reveal the effects of apoptosis-triggering dose of EGCG on pro-and apoptotic gene expression and to investigate the importance of overexpressed apoptotic proteins by gene-silencing. Beside of this, oxidative influence of EGCG, produced in a cell by its prooxidant property, was intended for measurement with rective oxygen species.On this aim, HCT- 116Bax+/+ ve HCT116Bax-/- human colorectal tumor cell lines were used in the study. The effect of EGCG on cell viability is determined with MTT method, cell death type is examined by flow cytometric analyses. The changes in protein expression levels of caspases is determined by western-blotting method. The effect on pro-and apoptotic gene expression is analysed by Real-Time PCR method. The initiator caspases of intrinsic and extrinsic apoptosis pathways, caspase-8 and caspase-9 is selected for gene-silencing by siRNA. Reactive oxygen species produced by oxidative effects of EGCG was determined by flow cytometry.According to obtained gene and protein expression data, it is claimed that the apoptotic effect of EGCG occurs via caspase 8 enzyme-mediated extrinsic pathway, but caspase 9 enzyme-mediated intrinsic pathway enhances this effect indirectly and intracellular ROS production by EGCG has also roles in the mechanism.
Benzer Tezler
- Epitel hücre kökenli SERPINB1'in nötrofil elastaz ilişkili anti apoptotik ve pro apoptotik yolaklar üzerine etkisi
The effect of epithelial cell-derived SERPINB1 on neutrophil elastase-associated anti-apoptotic and pro-apoptotic pathways
BÜŞRA KILIÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İBRAHİM ÇAĞATAY KARAASLAN
- Nefrotik sendrom oluşturulan sıçanlarda resveratrol ve metformin tedavilerinin böbrek dokusundaki anti-apoptotik proteinlere etkileri
Effects of resveratrol and metformin treatments on anti – apoptotic proteins in kidney tissue in rats with nephrotic syndrome
BELÇİM HAZAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıBursa Uludağ ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BİLAL YILDIZ
- Karaciğer ve meme kanseri hücrelerinde çoklu ilaç direnci ve apoptotik proteinlerin gen ekspresyon düzeylerinin incelenmesi
Examining the gene expression levels of apoptotic proteins and multi drug resistance in liver and mammary cancer cells
GÖZDE AYDIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AYŞE ERCAN
- Characterizing the role and the regulation of a pro-apoptotic Bcl-2 family member, harakiri (HRK) in glioblastoma multiforme
Bir pro-apoptotik Bcl-2 ailesi üyesi olan Harakiri'nin (HRK) Glioblastoma Multiforme tümörlerindeki rolünün ve düzenlenmesinin incelenmesi
EZGİ KAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Moleküler TıpKoç ÜniversitesiBiyomedikal Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. TUĞBA BAĞCI ÖNDER
- Understanding the interplay between anti-apoptotic BAG-1 and AKT in mTORC1-mediated autophagy in breast cancer cell lines
mTORC1 aracılı otofajide anti-apoptotik BAG-1-AKT etkileşiminin meme kanseri hücre hatlarında araştırılması
ILGIN IŞILTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY