Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) ile farklı vücut sıvılarında, hassas bir malondialdehid (MDA) ölçüm yönteminin kurulması ve rutin kullanıma geçirilmesi
Building up a high pressure liquid chromatografic (HPLC) sensitive method for determination of malondialdehide (MDA) in various human body fluids and installing it as a routin assay
- Tez No: 311632
- Danışmanlar: DOÇ. DR. HALİL YAMAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı, Malondialdehit, Chromatography-high pressure-liquid, Malondialdehyde
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gata
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Lipid peroksidatif doku hasarını indükleyen reaktif oksijen türleri (ROS) ve serbest radikaller, çeşitli hastalıkların patogenezinde yer almaktadırlar. Lipid peroksidasyonu, malondialdehid (MDA) gibi sekonder ürünlerin ölçümü ile indirekt olarak değerlendirilmektedir. MDA, serbest radikallerin çoklu doymamış yağ asitlerine (ÇDYA) atağı sonucu oluşan peroksitlerin kendiliğinden yıkımı sonucu meydana gelen üç karbonlu, düşük moleküler ağırlıklı bir üründür.Tiyobarbitürik asit (TBA) ile MDA analizi, biyolojik sistemlerde lipid peroksidasyonunun değerlendirilmesinde yıllardır yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu yöntem, asidik koşullar altında örneğin ısıtılması sonucu MDA-TBA kompleksi oluşumu prensibine dayanan spektrofotometrik bir yöntemdir. Bu reaksiyon, basit ve tekrarlanabilir olmasına karşın TBA'nın karbonil içeren diğer bileşiklerle de reaksiyona girebilmesinden dolayı MDA ölçümleri için spesifik bir reaksiyon değildir. Plazma yağ asitleri de TBA ile 95 -1000C' de ısıtma basamağında okside olarak yanlış yüksek sonuçların ortaya çıkmasına neden olabilir. Bu zorlukların üstesinden gelebilmek için, MDA düzeyini belirlemede doğru ve spesifik olan direkt bir kromatografik yöntem geliştirilmiştir. TBA sadece MDA ile değil diğer birçok bileşikle reaksiyona girdiği için MDA'nın 2,4-dinitrofenilhidrazin (DNPH)'le türevlendirilerek pirazol ve hidrazin türevlerine çevrilmesinin, bu bileşiklerin daha spesifik ölçümlerine izin verdiği bulunmuştur. Biyolojik örneklerde yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi kullanılarak bu türevlerin ayrımı gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada, insan serumunda DNPH ile MDA'nın türevlendirilmesi sonrası HPLC-DAD dedektörü ve TBA testi ile MDA düzeyinin ölçülmesi amaçlanmıştır. Ayrıca HPLC ve spektrofotometrik yöntemleri karşılaştırdık.
Özet (Çeviri)
Reactive oxygen species (ROS) and particularly free radicals induced lipid peroxidative tissue damage have been implicated in the pathogenesis of various diseases. Lipid peroxidation is assessed indirectly by the measurement of the secondary products such as malondialdehyde (MDA). MDA has three-carbon atoms and low molecular weight and spontaneous breakdown product of peroxides that can be produced from free radicals attack on polyunsaturated fatty acids (PUFAs).The analysis of MDA by the thiobarbituric acid(TBA) assay has been widely employed over the many years in biological systems for the assessment of lipid peroxidation. It is a spectrophotometric assay, based upon heating of the sample under acidic conditions to form the adduct of MDA-TBA. This reaction, although simple and reproducible, is unfortunately rather non-specific as TBA reacts with many other carbonyl-containing compounds. Plasma fatty acids can also be oxidized during the 95 -100 oC heating step with TBA, generating artificially high results. In an attempt to over come these difficulties, in a direct chromatographic assay suitable to be applied for accurate and specific quantification of MDA have been developed. However, TBA reacts not only MDA but also with many other compounds. Therefore, derivatization of MDA with 2,4 dinitrophenylhydrazine (DNPH) and conversion into pyrazol and hydrazine derivatives has since been found to allow a more specific estimation of these compounds, especially if combined with their separation using high pressure liquid chromatography (HPLC) in the biological samples. In this study, our purpose is to measure the levels of MDA with TBA test and HPLC-DAD after derivatisation of MDA with DNPH in human serum. Furthermore, we compared HPLC and spectrophotometric methods.
Benzer Tezler
- Yüksek Performanslı Likid Kromatografi (HPLC) yöntemi idrar oksalik asit ve sitrik asit düzeylerinin belirlenmesi
Determination of oxalic acid and citric acid levels in urine by High Performance liquid chromatografi (HPLC)
MUKADDER ERDEM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
BiyokimyaOndokuz Mayıs ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULKERİM BEDİR
- Step-growth polymerization of formaldehyde and paraformaldehyde with amine monomers for preparing monolithic capillary columns
Kapiler monolitik kolon hazırlanması amacıyla formaldehit ve paraformaldehitin amin monomerler ile basamaklı polimerizyonu
SİNEM ÖZMEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Polimer Bilim ve Teknolojisiİstanbul Teknik ÜniversitesiPolimer Bilim ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATOŞ YÜKSEL GÜVENİLİR
- Bazı antidepresanların vücut sıvılarında yüksek performans sıvı kromatografi yöntemi ile tayini için metot optimizasyonu
The optimization of HPLC method for the analysis of some antidepressants in human fluids
ESMA ETÖZ MAVİ
- Bir grup oksidatif stres biyogöstergesinin eş zamanlı tayini için izokratik ve gradient HPLC yöntemlerinin geliştirilmesi ve analitik yöntem geçerliliği çalışmaları
Isocratic and gradient HPLC method development and analytical method validation studies for the simultaneous determination of A group of oxidative stress biomarkers
AYŞE ŞENGÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
KimyaEge ÜniversitesiAnalitik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA EMRAH KILINÇ
- Farklı çözücülerle hazırlanmış bitki özütlerindeki karbonik anhidraz (CA) inhibisyon seviyelerinin belirlenmesi; ca araştırmalarında yeni yaklaşımlar
Determining the level of carbonic anhydrase (CA) inhibition of plant extracts prepared by different solvents; new approaches in ca research
DERYA CANSIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MURAT KÜÇÜK