Kemik Paget hastalığı ve frontotemporal demans ile gözlenen inklüzyon cisimcik miyopati hastalığında görülen mutasyonların Endoplazmik Retikulum ilişkili protein yıkım mekanizması (ERİY) üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effect of mutations causing inclusion body myopathy with Paget's disease of bone and frontotemporal dementia on Endoplasmic Reticulum-associated degradation (ERAD)
- Tez No: 298917
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. PETEK BALLAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Moleküler Tıp, Biochemistry, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Endoplazmik retikulum, Frontotemporal demans, Genler, Kemik hastalıkları, Kromozomlar, Miyopati, Mutasyon, Endoplasmic reticulum, Frontotemporal demantia, Genes, Bone diseases, Chromosomes, Myopathy, Mutation
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, IBMPFD hastalığı ile ilişkilendirilen 11 farklı VCP mutasyonlarının ERİY mekanizması üzerine etkileri incelendi. Ayrıca VCP'deki bu mutasyonların, VCP'nin Ufd1 ve Npl4 ile etkileşmesinde bir değişikliğe neden olup olmadığı araştırıldı.Bu amaçla, bugüne kadar IBMPFD ile ilişkilendirilen 11 farklı VCP mutantı yönlendirilmiş mutajenez ile elde edildi. ERİY substratı eksprese eden 293 HEK hücrelerine IBMPFD'li mutantlar, yabanıl VCP ve ATPaz inaktif mutant VCP-QQ ile birlikte transfeksiyonu yapıldı. Ardından immünoblot yöntemi ile ERİY üzerindeki etkilerine bakıldı. Çalışmada ERİY substratları olarak CD3?, CFTR?F508 ve Tirozinaz C89R kullanıldı. VCP'nin Ufd1 ve Npl4 ile etkileşmelerine, Npl4-Ufd1 eksprese eden 293 HEK hücrelerine IBMPFD'li mutantların transfeksiyonunun ardından VCP'nin immünopresipitasyon yöntemi ile çöktürülmüş ve immünoblot analizi yapılmıştır.Yapılan çalışmalar sonucunda, IBMPFD ile ilişkilendirilen mutasyonların sadece VCP'nin N bölgesinde lokalize olan R93C, R95C, P137L, R155C, R155S, G157 ve R159C mutasyonlarının ERİY substratlarında belirgin birikime neden olduğu görüldü. İmmünopresipitasyon sonuçlarına göre mutantlardan sadece P137L'nin hem Ufd1 hem de Npl4 ile etkileşemediği görüldü. Ayrıca bu çalışma ile P137L-VCP dışındaki tüm IBMPFD ilişkili VCP mutantların Ufd1-Npl4 kompleksi ile yabanıl tip VCP'ye göre daha fazla etkileştiği bulunmuştur. Çalışmada elde edilen sonuçlara dayanarak VCP'nin N bölgesinde yer alan 137. konumunda bulunan prolin aminoasitinin ya da 137. aminoasit çevresindeki bir bölgenin Ufd1-Npl4 ile etkileşmesinde işlevi olduğunu düşünmekteyiz.Bu sonuçlara göre VCP'nin sadece kofaktör etkileşiminde önemli olan N bölgesinde bulunan mutasyonları, ERİY üzerinde belirgin bir işlev bozukluğuna neden olmaktadır. Gelecekte yapılacak çalışmalarla N bölgesindeki mutasyonların ERİY mekanizması üzerindeki etkilerinin moleküler ayrıntıları incelenecek ve P137L mutant VCP'nin Ufd1-Npl4 ile etkileşmesini nasıl inhibe ettiği araştırılacaktır.
Özet (Çeviri)
In this study, the effect of all reported IBMPFD-associated VCP mutations on ERAD pathway was investigated. Furthermore, the hypothesis that these VCP mutations cause an imbalance in VCP-Ufd1-Npl4 complex was analyzed.To test the hypothesis, 11 IBMPFD-associated VCP mutations were generated using site-directed mutagenesis. VCP mutants, wt-VCP and ATPase inactive mutant encoding plasmids were transfected in 293 HEK cells expressing ERAD substrates (CD3?, CFTR?F508 and Tyrosinase C89R). Afterwards, analysis the effect of IBMPFD mutants on ERAD was determined by immunoblot. The interaction of VCP and Ufd1-Npl4 were examined in 293 HEK cells expressing Npl4-Ufd1 by IP.Our results revealed that only mutantions localized within N domain of VCP (R93C, R95C, P137L, R155C, G157R and R159C mutations) increased the levels of ERAD substrates. Our IP results demonstrated that only P137L VCP does not interacted with Npl4 and Ufd1. However, other 10 mutants interact with Ufd1-Npl4 more than VCP-wt expressing cells. We suggest that proline at position 137 or a region including this aminoacid might have an important role in VCP-Npl4-Ufd1 interaction.These results suggest that mutations only within N domain of p97/VCP abrogate its function during ERAD. Further studies will focus on molecular mechanisms of this inhibition and the role of aminoacid at position 137 of VCP in VCP-Ufd1-Npl4 interaction.
Benzer Tezler
- Kemik paget hastalığı ve frontotemporal demans ile gözlenen inklüzyon cisimcik miyopati hastalığıyla (IBMPFD) ilişkili bazı vcp mutant proteinlerin rekombinant DNA teknolojisi ile saflaştırılması ve in vitro bağlanma modellerinin incelenmesi
Purification of inclusion body myopathy with paget?s disease of the bone and frontotemporal dementia (IBMPFD) associated some VCP mutant proteins by recombinant dna technology and investigation of the in vitro binding patterns
YALÇIN ERZURUMLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Moleküler TıpEge ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. PETEK BALLAR KIRMIZIBAYRAK
- 2008-2018 yılları arasında Dokuz Eylül Üniversitesi Hastanesi Erişkin Endokrinoloji Bilim Dalında izlemde olan Paget Hastalığı (Osteoitis Deformans) hastalarının ALP düzeylerinin ve tedavi etkinliğinin retrospektif olarak değerlendirilmesi
Retrospective evaluation of ALP levels and treatment efficacy of Paget Disease (Osteoitis Deformans) patients who were followed up in Dokuz Eylül University Hospital Endocrinology Department between 2008-2018
BURCU ERTÜTEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıDokuz Eylül Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FIRAT BAYRAKTAR
- Paget hastalığının klinik, demografik özellikleri ve tedavi yanıtlarının retrospektif değerlendirilmesi
Retrospective evaluation of clinical, demographic characteristics and treatment response of paget's disease
MELİKE YAKARÖZKAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıBursa Uludağ Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZEN ÖZ GÜL
- Otosklerozlu hastalarda kemik yıkım metaboliti deoksipiridinolinin idrar düzeylerinin değerlendirilmesi ve bulguların temporal kemik bilgisayarlı tomografi ve dansitometri verileri ile korelasyonu
Evaluation of metabolism on bone resorption, urinary deoxypyridinoline levels and the correlation of results with temporal bone computed tomography and densitometry data in patients with otosclerosis
PINAR TUNÇBİLEK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2015
Kulak Burun ve BoğazDokuz Eylül ÜniversitesiKulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENİS ALPİN GÜNERİ
- Kültür ortamında bifosfonat eklenmiş kemik rejenerasyon deneysel modeline mezenkimal kök hücre ve borik asit tedavilerinin kemik dokusuna etkisi
Effect of mesenchymal stem cell and boric acid treatments on bone tissue in an experimental model of bisphosphonate-assisted bone regeneration in culture media
GÖKCAN ŞAHİN
Diş Hekimliği Uzmanlık
Türkçe
2022
Diş Hekimliğiİzmir Katip Çelebi ÜniversitesiAğız, Diş ve Çene Cerrahisi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ONUR ŞAHİN