Immunochemical and sub-structural characterization of sheep lung cytochrome P450LgM2
Koyun akciğer sitokram P450 LgM2'nin immünokimyasal ve altyapısal karakterizasyonu
- Tez No: 29267
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ORHAN ADALI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Koyun akciğer mikrozomları, akciğer sitokrom P450LgM2, peptit haritası, NH2-terminal asit analizi, biyokatalitik aktivite, antikor inhibisyonu. Bilim dalı, Akciğer, Enzimler, Koyunlar, Sheep lung microsomes, lung cytochrome P450LgM2, peptide mapping, NH2-terminal amino acid analysis, biocatalytical activity, antibody inhibition, Lung, Enzymes, Sheep
- Yıl: 1993
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
oz KOYUN AKCİ?ER SITOKROM P450LgM2'nin İMMÜNOKİMYASAL VE ALTYAPISAL KARAKTERİZAS YONU ABU-BAKER, Talal Yüksek Lisans Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Orhan ADALI Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Emel ARINÇ Kasım 1993, 102 sayfa Akciğer havada bulunan çeşitli kirleticilerin ve potansiyel karsinoj enlerin esas giriş kapısı olduğu için, sitokrom P450 enzimlerinin akciğerde özel bir önemi vardır. Çeşitli türlerin akciğerleri, benzerlikler gösteren sitokrom P450 tiplerine sahip olmasına rağmen, aralarında bazı önemli farklılıklar olabilir. Koyun akciğer sitokrom P450LgM2 izozimi deterjan ile çözünürleştirilmiş koyun akciğer mikrozomlarından, dört kromatografik basamak kullanılarak saflaştırıldı ve laboratuvarımızda daha önce geliştirilen metotlar kullanılarak sitokrom P450LgM2'ye karşı tavşanlarda antikor üretildi. P450LgM2 antikorlarının sitokrom P450LgM2 tarafından katalize edilen reaksiyonlara etkisi incelendi. Koyun akciğer mikrozomlannm benzfetamin N-demetilaz aktivitesi P450LgM2 antikorları tarafından tamamen inhibe edildi. Akciğer mikrozomlarına benzer olarak, saflaştırılmış koyun akciğer sitokrom P450LgM2 veya fenobarbital (PB) ile muamele edilmiş tavşan karaciğer sitokrom P450LM2 ile rekonstitute (yeniden oluşturulan) sistemlerin benzfetamin N-demetilaz aktivitesi, birbiri ardına,P450LgM2 antikorları tarafinden %95 ve %82 oranlarında inlıibe edildi. P450LgM2 antikorlarının inlıibisyon etkisi, koyun akciğer mikrozomlarınm ve saflaştınlmış koyun akciğer sitolcrom P450LgM2 ile rekonstitute sistemin etilmorfîn N-demetilaz aktivitesinde de gözlendi. Etilmorfîn N-denıetilasyon reaksiyonunun sonuçlan, akciğer mikrozomlarında %80, rekonstitute sistemde %50 oranlarında inlıibisyon olduğunu gösterdi. Koyun akciğer mikrozomlannm anilin 4- hidroksilaz aktivitesi, P450LgM2 antikorları tarafından %62 oranında inlıibe edildi. Koyun akciğer sitokrom P450LgM2 ve PB-tavşan karaciğer sitolcrom P450LM2 (IIB4) izozimleri, kimotiripsin ve papain kullanılarak kısmi proteolize tabi tutulduğunda, oluşan peptitler SDS-poliakrilamit jel elektroforezi ile analiz edilip, gümüş boyaması ile gözlemlendiğinde, ufak farklılıklar (genelde benzer) göstermiştir. Ayrıca, koyun akciğer sitokrom P450LgM2 izozirninin NH?- terminalindeki amino asiti, farklı solvent sistemleri kullanılarak silika jel ince tabaka kromatografisi ile analiz edildiğinde, metionin olarak bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT IMMUNOCHEMICAL AND SUB-STRUCTURAL CHARACTERIZATION OF SHEEP LUNG CYTOCHROME P450LgM2 ABU-BAKER, Talal M. Sc. in Biochemistry Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Orhan ADALI Co-Supervisor: Prof. Dr. Emel ARINÇ November 1993, 102 pages. Cytochrome P450 enzymes, are of particular importance in lung since the lung is the main portal of entry for various airborne contaminants and potential carcinogens. Although the lungs from a number of species, have similarities in the types of P450 isozymes, some important differences may exist among them. Sheep lung cytochrome P450LgM2 was purified from detergent solubilized sheep lung microsomes by four chromatographic steps and antibodies against cytochrome P450LgM2 were produced in rabbits by using the previously developed methods in our laboratory. The effect of P450LgM2 antibodies on cytochrome P450LgM2 catalyzed reactions were examined. Benzphetamine N- demethylase activity of sheep lung microsomes was inhibited by P450LgM2 antibodies completely. Similar to lung microsomes, benzphetamine N-demethylase activity of the reconstituted systems containing purified sheep lung cytochrome P450LgM2 or phenobarbital (PB)-treated rabbit liver cytochrome P450LM2 was also inhibited by P450LgM2 antibodies about 95% and 82%, respectively. Inhibitory effect of P450LgM2 antibodies was also observed in ethylmorphine N-demethylase mactivity of sheep lung microsomes and reconstituted system containing purified sheep lung cytochrome P450LgM2. The results of ethylmorphine N-demethylation reaction showed 80% inhibition in lung microsomes and about 50% inhibition in reconstituted system. Aniline 4-hydroxylase activity of sheep lung microsomes was inhibited 62% by P450LgM2 antibodies. Partial proteolysis of sheep lung cytochrome P450LgM2 and PB-rabbit liver cytochrome P450LM2 (2B4) isozymes using chymotrypsin and papain showed minor differences (similar in general) in peptide formation when analyzed by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis and visualized by the silver staining method. In addition, NH2-terminal amino acid residue of sheep lung cytochrome P450LgM2 was identified as a methionine residue analyzed by thin layer chromatography on silica gel plates using different solvent systems.
Benzer Tezler
- Purification and characterization of cytochrome P4501A1 and cytochrome P450 reductase from feral leaping mullet (Liza salines) liver microsoms
Sitokrom P4501A1 ve P450 redüktazın doğal kefal balığı karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
ALAATTİN ŞEN
Doktora
İngilizce
1997
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Fötal ikili iskelet boyama yönteminde mikrodalga ışınımlarının uygulanması
The Application of microwave radiation in the method of fetal double skeletion staining
HATİCE KOCABIYIK
- Türkiyedeki selektif komple CIq eksikliği üzerine moleküler ve epidemiyolojik çalışmalar
Molecular and epidemiologic studies on selective comple CIq deficiency in Turkey
ESRA BİRBEN
- Anevrizmal kemik lezyonlarının histokimyasal ve immünhistokimyasal özelliklerinin klinik davranışları ile ilişkisi
Correlations between histochemical and immunhistochemical features and clinical behaviour of aneurysmal bone lesions
NİHAN AKSAKALLI
Doktora
Türkçe
2001
Onkolojiİstanbul ÜniversitesiKlinik Onkoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLÇİN ERSEVEN
- Field evaluation of cytochome P450 1A1 MRNA levels as a monitor for chemical
Sitokrom P450 1A1 MRNA seviyesinin kimyasal kirliliğin monitoründe joker olarak kullanılması
ERKAN SU
Yüksek Lisans
İngilizce
1998
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL ARINÇ