Production and purification of rtem-1 beta-lactamase and its inhibition by peptides
Rtem-1 ßeta-laktamaz?ın üretimi, saflaştırılması ve peptitler ile inhibisyonu
- Tez No: 290344
- Danışmanlar: DOÇ. DR. BERNA SARIYAR AKBULUT, PROF. DR. DİLEK KAZAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ß-laktam antibiyotikleri yüksek etki, düşük fiyat ve minimum yan etkilerinden dolayı yaygın kullanılan antibiyotiklerdendir. Bu antibiyotiklerin sık ve aşırı kullanımı ise bakterilerin bu ilaçlara direnç geliştirmesine neden olmaktadır. ß-laktam antibiyotiklerine karşı en yaygın rastlanan direnç; Gram-pozitif ve Gram-negatif bakteriler tarafından sentezlenen ve ß-laktam antibiyotiklerinin ß-laktam halkalarının kırılmasına neden olan ß-laktamaz enziminin sentezi ile meydana gelmektedir. 263 amino asit uzunluğunda periplazmik bir protein olan RTEM-1 ß-laktamaz, A sınıfı bir ß-laktamaz olup penisilin, sefalosporin gibi antibiyotikleri hidrolize edebilmektedir. Streptomyces clavuligerus tarafından üretilen 165 amino asitlik ß-laktamaz inhibitör proteini (BLIP) TEM-1, SHV-1 gibi A sınıfı ß-laktamazlara farklı ilgilerle bağlanarak onları inhibe edebilmektedir.Bu çalışmanın amacı RTEM-1 ß-laktamazı saflaştırmak ve BLIP ile RTEM-1 ß-laktamazın hücre içi koşullarda bağlanma ve inhibisyon kinetiğini aydınlatmaktır. İki molekülün birbiriyle etkileşimi daha önce yapılmış in-vitro çalışmalarla doğrulanmıştır. Bu amaçla pUC18 vektörü içeren E. Coli TB1 hücrelerinde üretilen RTEM-1 ß -laktamaz, periplazmik bir protein olması nedeniyle, ozmotik şok ile hücre dışına alındıktan sonra ultrafiltrasyonu takiben yapılan iyon değişim kromatografisi ile 5,1 kat saflaştırılmıştır. Enzimin saflığı sodyum dodesil sulfat poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile kontrol edilmiştir. BLIP ile yapılan çalışmalar sonucunda, BLIP'in saflaştırılan enzimi yarışmasız inhibe ederken, saf ticari enzimi yarışmalı inhibe ettiği görülmüştür.
Özet (Çeviri)
ß-lactam antibiotics are the most commonly used antibiotics due to their high effectiveness, low cost, ease of delivery and minimal side effects. As a result of wide use of these antibiotics, bacteria render resistance to ß-lactam antibiotics. One mechanism of ß-lactam resistance is the synthesis of ß-lactamase by both Gram-positive and Gram-negative bacteria. This enzyme hydrolyzes the amide bond of the ß-lactam antibiotics causing them to be ineffective. The most prevalent ß-lactamase is the class A RTEM-1 ß-lactamase which is a periplasmic protein with 263 amino acids. Streptomyces clavuligerus produces a protein inhibitor of ß-lactamase called ß-lactamase inhibitor protein (BLIP) which is a 165 amino acid protein. BLIP inhibits class A ß-lactamases such as TEM-1 or SHV-1 with varying degrees.The aim of this study was to purify ß-lactamase and elucidate the intracellular binding and inhibition kinetics of BLIP and ß-lactamase. The interaction of these molecules has previously been verified by in-vitro studies. The wild-type form of RTEM-1 ß-lactamase has been produced by E. Coli TB1 pUC18 cells and purified 5.1 times from the periplasmic protein extract by ultrafiltration and ion exchange chromatography methods. Purified enzymes are used for subsequent ß-lactamase assays. Competitive inhibition of commercial pure RTEM-1 ß-lactamase by BLIP was demonstrated however BLIP was found to be an uncompetitive inhibitor of the purified periplasmic protein extract.
Benzer Tezler
- Çeşitli kaynaklardan izole edilen debaryomyces hansenii strainlerinin moleküler biyolojik tanısı, killer toksin üretimi, saflaştırılması ve biyokontrolde kullanılması
Molecular biological characterization, killer toxin production, purification and use in biocontrol of debaryomyces hansenii strains isolated from different sources
CENGİZ ÇORBACI
- Optimization of the production process and purification of SARS-CoV-2 S1 protein using SUMO fusion tag and DSBC leader peptide
Başlık çevirisi yok
MELİKE YAĞMUR ÜNAL
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER YAĞCI
DR. HASAN ÜMİT ÖZTÜRK
- Production, purification and characterization of thermostable protease from alkaliphilic and thermophilic Geobacillus sp.
Alkalifilik ve termofilik Geobacillus sp.?den termal kararlı proteaz enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
SEDEN GÜRACAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
Biyokimyaİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI
- A theoretical study on catalytic steps of hydrogen production and purification
Hidrojen üretimi ve saflaştırılması aşamalarında kullanılan katalitik sistemlerin kuramsal olarak incelenmesi
ASLIHAN SÜMER
Doktora
İngilizce
2010
KimyaBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ERHAN AKSOYLU
- Cloning, production, purification, and characterization of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF)
Granülosit-koloni uyarıcı faktörü (G-CSF) klonlanması, üretimi, saflaştırma ve karakterizasyonu
CANSIN KIRMAÇOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
