Transformation of Aspergillus sojae with Vitreoscilla hemoglobin gene
Vitreoscilla hemoglobin geniyle Aspergillus sojae?nin transformasyonu
- Tez No: 276974
- Danışmanlar: DOÇ. DR. CANAN TARI, YRD. DOÇ. DR. ALPER ARSLANOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Dönüşüm, Elektrogeçirgenlik yöntemi, Protoplast, Transformation, Electroporation method, Protoplast
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Koji küfü olarak bilinen Aspergillus sojae, FDA tarafından genel olarak güvenli kabul edilmiştir. Bu organizmayla ilgili sınırlı sayıda çalışma rapor edilmiş olup, bu çalışma, A. sojae'nin Vitreoscilla hemoglobin geni kullanılarak transformasyonuyla ilgili yapılan tek çalışmadır. Mikroaerofilik koşullarda oxygen transferini artıran Vitreoscilla hemoglobini bir bakteriyel hemoglobindir. Yüksek oksijen miktarına ihtiyaç duyan endüstriyel fungal fermentasyonları, enzim, antibiyotik ve organik asit gibi değerli ürünlerin üretimi sırasında oksijen sınırlamasıyla karşılaştığından, bu sistemlere oksijen sağlamak üreticiler tarafından çözülmesi gereken önemli bir sorundur. Bu problemin çözümü için Vitreoscilla'dan elde edilen vgb geni ve rekombinant DNA teknolojisi kullanılması ile ilk etapta örnek olarak, A. sojae organizması model olarak önerilmiştir. Bu çalışmada üretilen ürün, gıda, ilaç, tekstil ve kağıt endüstrisinde geniş kullanım alanına sahip ekzo-polygalakturonaz enzimidir. Transformasyon aşaması için vgb geni ilk olarak ANIp4 plasmidine klonlanmıştır. Transforme edilmiş A. sojae hücrelerinin seçimi için UV mutasyonundan sonra üridin okzotrofik mutantlar seçilmeye çalışılmış, ancak, üridin destekli büyümeye dayalı seçim metodu ile A. sojae pyrG mutantlarının seçimi sonuç vermemiştir. Transformasyonun başarılı oluşu ilk olarak PCR analizleri ve gel electroforezi yöntemiyle daha sonra ise sekans analizi yöntemleriyle doğrulanmaya çalışılmıştır. Ancak kontaminasyondan ileri gelen problemlerden dolayı transformasyon işleminin tam olark gerçekleşip geçekleşmediğinde emin olunamamıştır.
Özet (Çeviri)
Aspergillus sojae known as koji mold is a non-aflatoxigenic fungus, designated with a GRAS status by FDA. This study considers the transformation of A. sojae with Vitreoscilla hemoglobin gene. Vitreoscilla hemoglobin is the bacterial hemoglobin, which enhances the oxygen transfer under microaerophilic conditions. Since industrial fungal fermentation with the high demand for oxygen are accounted to face oxygen limitations during the production of value added products like enzymes, antibiotics and organic acids; oxygen supply becomes an enormous problem to be solved by the manufacturers. To overcome this problem, an alternative solution using the vgb gene of Vitreoscilla and recombinant DNA technology and taking the A. sojae organism as model organism was proposed. The product of interest in this study was the exo-polygalacturonase enzyme known to have wide applications in food, pharmaceutical, textile and paper industries. Here vgb gene was tried to be introduced to A .sojae via both protoplasting and electroporation methods. For transformation process vgb gene was cloned initially into plasmid ANIp4. For the selection of transformed A. sojae cells, uridine auxotrophic mutants were tried to be selected after UV mutagenesis. However, using a procedure based on selection of uridine supported growth did not result in A. sojae pyrG mutants. The success of transformation was initially observed by means of PCR analysis and agarose gel electrophoresis, later this was try to be confirmed by sequence analysis and agarose gel electrophoresis. However, due to the contamination problems accounted in the procedures the transformation with both methods could not be assured.
Benzer Tezler
- Fibrinolitik enzim olan nattokinaz'ın Aspergillus oryzae'de üretimi ve saflaştırılması
Production and purification of fibrinolytic enzyme nattokinase in Aspergillus oryzae
DİCLEHAN GÜNDÜZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyoteknolojiBezm-İ Alem Vakıf ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DR. ÖĞR. ÜYESİ SERDAR UYSAL
- Increase of alpha amylase production of aspergillus oryzae by electroporation
Aspergillus oryza'de alfa amilaz ürtetiminin elektroporasyon yöntemi ile artırılması
VELDA ÜNAL
Yüksek Lisans
İngilizce
1996
Bilim ve TeknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ
- Timokinonun mikrobiyal biyotransformasyonu
Microbial transformation of thymoquinone
GAMZE ÇAYIRDERE
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
BiyoteknolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakognozi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİH DEMİRCİ
- Sedrol'ün mikrobiyal transformasyon ürünleri
Microbial transformation products of Cedrol
ŞEMSİDİN SKEYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2000
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakognozi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEŞE KIRIMER
- Mikrobiyal transformasyon ile gıda katkı maddesi üretimi
Production of food additive by microbial transformation method
MESUT KAPLAN