Geri Dön

HeLa hücre kültürlerinde apoptoz ve moleküler mekanizması

Apoptosis and its molecular mechanism in HeLa cell cultures

PDF İndir

  1. Tez No: 252846
  2. Yazar: UĞUR SERBES
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. GÜL ÖZCAN ARICAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Apoproteinler, Apoptozis, Neoplazmlar, Polimeraz zincirleme reaksiyonu, Apoproteins, Apoptosis, Neoplasms, Polymerase chain reaction
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bu çalışmada, kanser kemoterapisinde aktif olarak kullanılan bir kemoterapötik ajan olan Paklitaksel'in insan serviks karsinomu kökenli HeLa hücre soyu üzerine apoptotik etkisi ve bu etkinin moleküler mekanizması ele alındı. Öncelikle seçilen 6 doz (D1= 3 nM, D2= 7,5 nM, D3= 15 nM, D4= 30 nM, D5= 60 nM, D6= 120 nM) ile 48 saat boyunca hücre kültürleri inkübe edildi. Mitokondrial dehidrogenaz enzim aktivitesi analizi ile çoğalma hızları incelendi. 4'-6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI) uygulaması ile floresan mikroskopta apoptotik indeks değerleri belirlendi ve sitotoksisite analizi ile karşılaştırılarak D3 dozu (D3= 15 nM) optimum doz olarak belirlendi.Belirlenen optimum doz (IC50) ile 48 saatlik süreçte hangi saatlerde en yüksek sitotoksisite ve apoptotik indeks değerlerine ulaşıldığının tespiti için 0- 48 saat (0s, 4s, 8s, 12s, 24s, 36s, 48s) zaman periyodunda D3 dozunun uygulandığı HeLa hücre kültürlerinde çoğalma hızı ve apoptotik indeks tespiti yapıldı. Sonuçlar 48 saatlik inkübasyon süresinde kontrole göre en yüksek sitotoksisite ve apoptotik indeks değerlerine ulaşıldığını gösterdi (p<0,05).D3 dozu (D3= 15 nM) ile 48 saat süre sonunda hücrelerde meydana gelen apoptozun moleküler seviyede tespiti için agaroz jel elektroforezi yöntemi ile DNA fragmentasyonu, Revers Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) tekniği ile apoptozda fonksiyonel bcl-2 gen ailesinin (mcl-1, bfl-1, bax, bcl-2, bak, bik, bcl-x) anlatımları ve floresan spektroskopi ile kaspaz 3, 7 ve 10 enzimlerinin zamana bağlı olarak aktivasyonları gösterildi (p<0,05).Sonuç olarak D3 dozunun 48 saat uygulanmasına bağlı olarak bcl-2 gen ekspresyonunun olmadığı ve bcl-x geninin ekspresyon seviyesinde kontrole göre bir azalmanın olduğu tespit edildi. Ayrıca çalışmada kaspaz 3, 7 ve 10 enzimlerinde saptanan aktivasyon ile, HeLa hücrelerinde Paklitaksel'in teşvik ettiği apoptozun kaspaz bağımlı apoptotik yol ile gerçekleştiği sonucu ortaya kondu.

Özet (Çeviri)

In this project, apoptotic effect of Paclitaxel, which is a chemotherapeutic agent and has an active role in cancer chemotherapy, and its molecular mechanisms in HeLa cell line originated from human servical carcinoma has been investigated. At first, cells incubated with 6 different doses (D1= 3 nM, D2= 7,5 nM, D3= 15 nM, D4= 30 nM, D5= 60 nM, D6= 120 nM) for 48 hours. Proliferation rates investigated by mitochondrial dehydrogenase enzyme activity analysis. Apoptotic index determined by 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining application under flouroscent microscope and D3 dose (D3= 15 nM) has been decided as optimum dose after comparing the results with cytotoxicity analysis.To determine the highest cytotoxicity and apoptotic index values caused by determined optimum dose (IC50) in 48 hours time period, proliferation rate and apoptotic index analysis have been conducted for D3 dose applied HeLa cell cultures between 0 to 48 hours (0h, 4h, 8h, 12h, 24h, 36h, 48h). According to the results cytotoxicity and apoptotic index values reached to the highest level in 48 hours incubation time, comparing to the control (p<0,05).To evaluate molecular level of apoptosis, which induced by D3 dose (D3= 15 nM) after 48 hours time period in cells, DNA fragmentation hes been shown by agarose gel electrophoresis method, bcl-2 gene family (mcl-1, bfl-1, bax, bcl-2, bak, bik, bcl-x) expression presented by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) technique and time dependent activation of caspase 3, 7 and 10 has been shown by flouroscent spectroscopy (p<0,05).As a result, it has been observed that bcl-2 expression did not occur and bcl-x expression level showed a decrease depending on 48 hours D3 treatment, comparing to control. Also, it has presented by observed caspase 3, 7 and 10 enzyme activation that Paclitaxel induced apoptosis in HeLa cells is caspase dependent.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    282592

    Hücre kültürlerinde oksidatif stres sonucu oluşan DNA hasarları ve zeytinyağının koruyucu etkisi

    Oxidative stress-induced DNA damages in cell culture and protective effect of olive oil

    ÖZLEM EROL DAYİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜNHAN ERDEM

    PROF. DR. NAZLI ARDA

  2. Tez No

    283126

    Nanoteknolojik bir ilaç olan sutent'in kanser hücrelerinin proliferasyonuna etkisi

    The effect of nanotechnological medicine sutent on proliferation of cancer cells

    R.KAMURAN TEKİŞOĞULLARI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MEHMET R. TOPÇUL

  3. Tez No

    412524

    Servikal kanserde hedef tedavi: SRC tirozin kinaz inhibitörleri

    Targeted treatment for cervi̇cal cancer: SRC-tyrosi̇n ki̇naz i̇nhi̇bi̇tors

    ESAT ÇALIK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Kadın Hastalıkları ve DoğumCelal Bayar Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TEVFİK GÜVENAL

  4. Tez No

    195494

    TAF7 ekspresyonunun sirna ile baskılanması sonrasında apoptotik süreçteki değişikliklerin araştırılması

    Study of the apoptotic process and the effects induced by TAF7 gene expression silencing using sirna

    DİLEK GÖKTÜRK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Tıbbi BiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. ZEYNEP SERCAN

  5. Tez No

    195787

    A549, HeLa ve NIH3T3 hücre kültürlerinde hypericum perforatum, hypericum montbrettii ve hypericum origanifolium türlerinin sitotoksik ve antiproliferatif etkileri

    Cytotoxic and antiproliferative effects of hypericum perforatum, hypericum montbrettii and hypericum origanifolium species on A549, HeLa and NIH3T3 cell cultures

    GÖKÇEN GÜZEY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. YUSUF ÖZTÜRK

Geri Dön