Isolation and identification of a lipase producing psychrotrophic bacteria from soil: Cloning and partial characterization of its lipase
Lipaz üreten psikrotrof bir bakterinin toprakdan izolasyonu ve tanimlanmasi: Lipazin klonlanmasi ve kismi karakterizasyonu
- Tez No: 252262
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ALPER ARSLANOĞLU, YRD. DOÇ. DR. H.ÇAĞLAR KARAKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Lipazlar, Pseudomonas, Pseudomonas fluorescens, Triaçilgliserol, Lipases, Pseudomonas, Pseudomonas fluorescens, Triacylglycerol
- Yıl: 2009
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Lipazlar serin hidrolazlardır ve uzun zincirli triaçilgliserollerin hem hidroliz hemde sentezlerini katalizlerler. Lipazlar endüstrideki yaygın kullanımları nedeniyle büyük öneme sahiptirler. Lipazlar mikrooraganizmalar (bakteri ve mantarlar), bitkiler ve hayvanlar tarafından üretilirler. Fakat, mikrobiyal lipazlar, özellikle bakteri kaynaklı olanlar, birkaç önemli özellikleri nedeniyle bitki ve hayvan türevlerinden daha kullanışlıdırlar.Bu çalışmanın öncelikli hedefleri; Kayseri Erciyes'den gelen toprak örneğinden lipaz üreten bir bakterinin izole edilmesi ve 16S rRNA sekans analizi ile tanımlanması, lipaz geninin sekansının dejenere PCR ve invers PCR ile bulunması ve lipaz geninin aktif bölge rezidüleri gibi bazı önemli özellikler bakımından incelenmesidir. Bu çalışmanın diğer amaçları ise optimum lipaz üretim zamanı gibi lipaz üretim koşullarının belirlenmesi, doğal lipaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonudur. Saflaştırma amonyum sülfat çöktürmesi ve jel filtrasyonu ile gerçeklestirilmiştir. Enzim karakterizasyonu için spektrofotometrik lipaz methodu kullanılmıştır.Sonuç olarak, lipaz üreten bir bakteri rodamine B-zeytinyağı petri yöntemi kullanılarak toprakdan izole edilmiş ve 16S rRNA sekans homolojisine dayanarak Pseudomonas fluorescens in bir suşu olarak tanımlanmıştır. Lipaz geninin kısmi sekansı elde edilmiş ve aminoasit ve gen homoloji analizine göre Pseudomonas grup 3 lipaz grubuna ait olduğu önerilmiştir. Ayrıca, doğal lipaz enzimi kısmi olarak saflaştırılıp karakterize edilmiştir. Molekül ağırlığı sodyum dodesilsülfat poliakrilamit jel elektroforezi ile yaklaşık 43 kilodalton olarak hesaplanmıştır. Lipaz için optimum sıcaklık ve pH sırasıyla 45°C ve pH 8 olarak bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Lipases are serine hydrolases and catalyze both the hydrolysis and synthesis of long-chain triacylglycerols. Lipases have great importance since their wide usage in industry. Lipases are produced by microorganisms (bacteria and fungi), plants and animals. However, microbial lipases, especially from bacteria, more useful than their plant and animal derivatives because of several important properties.The primary goals of this thesis were to isolate and identify a lipase producing bacterium from soil sample from Erciyes mountain in Kayseri by 16S rRNA sequence analysis, find the sequence of lipase gene by degenerate PCR and inverse PCR and analyze of lipase gene for some important features like active site residues. The other purposes of this study were determination of lipase production conditions like optimum production time, partial purification and characterization of native lipase enzyme. Purification was performed by ammonium sulfate precipitation and gel filtration. Spectrophotometric lipase assay was used for enzyme characterization.As conclusion, a lipase producer bacterium was isolated from soil using rhodamine B-olive oil plate assay and identified as a strain of Pseudomonas fluorescens based on 16S rRNA sequence homology. Its partial lipase gene was obtained and it was suggested that the lipase belong to group 3 Pseudomonas lipases according to gene and amino acid homology search. Moreover, native lipase partially purified and characterized. The molecular mass of purified lipase was estimated to be approximately 43 kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature and pH for the lipase were found to 45°C and pH 8, respectively.
Benzer Tezler
- Buğdayda farklı melezleme teknikleri kullanarak tohum tutma oranının saptanılması
Başlık çevirisi yok
İSMAİL TÜZÜN
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
ZiraatUludağ ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALİS RUHİ EKİNGEN
- Çeltik kabuklarının yalıtım malzemesi olarak kullanılması
Başlık çevirisi yok
B.CİHAN ÇELEBİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Makine MühendisliğiUludağ ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET KIRBIYIK
- Marmara bölgesindeki kavun ve karpuz yetiştiriciliğinin bugünkü durumu, sorunları ve öneriler
The Status of melon and water melongrowing in Marmara region at present and its Problems and recommedations
MEHMET GÜLER
- Devlet Malzeme Ofisi satış maliyeti ve satış hasılatı trend analizi
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA BEREKET