Characterization and modulation by drugs and other effectors of bovine liver microsomal flavin monooxygenase (FMO)
Sığır karaciğer mikrozomal flavin monooksijenaz (FMO)'ın karakterizasyonu ve ilaçlar ile diğer efektörler tarafından modülasyonu
- Tez No: 153665
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ADALI, PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: FMO, flavin monooksijenaz, metimazol, imipramin, klorpromazin, sığır karaciğer mikrozomu, karakterizasyon, modülasyon, efektör, FMO, flavin-containing monooxygenases, methimazole, imipramine, chlorpromazine, bovine liver microsome, characterization, modulation, effectors. IV
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
oz SIĞIR KARACİĞER MİKROZOMAL FLAVİN MONOOKSİJENAZ (FMO) 'İN KARAKTERİZASYONU VE İLAÇLAR İLE DİĞER EFEKTÖRLER TARAFINDAN MODÜLASYONU Başer, Deniz Fulya Yüksek Lisans, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Orhan Adalı Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Emel Arınç Ocak 2004, 107 sayfa Flavin-içeren monooksijenazlar (FMO; E. C. 1.14. 13. 8), ilaçlar ve çevresel toksinlerin de dahil olduğu birçok değişik yabancı maddelerin, NADPH ve oksijene bağımlı oksidasyonunu katalize eden mikrozomal flavoprotein enzimlerdir. Azot, sülfür, fosfor ve selenyum heteroatomu içeren nükleofıller FMO'nun substratlarıdır. Sığır karaciğer mikrozomal FMO enzim aktivitesi, FMO enzimleri için çok özgün bir substrat olan metimazol kullanılarak karakterize edildi. 12 farklı sığır karaciğeri numunesinden mikrozomlar hazırlandı ve ortalama özgün FMO aktivitesi 2.37 ± 0.30 nmol/min/mg (Ortalama ± SH, n=12) olarak bulundu. Reaksiyon hızı 0.5 mg protein miktarına kadar doğru orantılı arttı. En yüksek FMO enzim aktivitesi 37 °C ve pH 8.0'de tespit edildi. FMO aktivitesi üzerine Triton X-100 ve Emulgen 913 deterjanlarının etkileri çalışıldı ve enzim aktivitesinin bu deterjanların herbirininreaksiyon ortamına eklenmesiyle tüm konsantrasyonlarda (0.1%- 1.0%) arttığı gözlendi. FMO enziminin metimazol substratı için görünen Vmax ve Km değerleri sırasıyla 1.23 nmol/dak/mg and 0.1 1 mM olarak bulundu. Sığır karaciğer mikrozomal FMO enziminin ısıya dayanıklılığı dört farklı sıcaklıkta çalışıldı; 24 °C, 37 °C, 50 °C ve 65 °C. Enzim aktivitesinin tamamen kaybolması için gereken inkübasyon süresi 65°C'de 5 dakika, 50 °C'de 10 dakika, 37 °C'de 6.5 saat olarak gözlendi. 24 °C'de 53 saatin sonunda halen %68 enzim aktivitesinin kaldığı görüldü. Sığır karaciğer mikrozomlarının imipramin ve klorpromazin gibi iki ilaç substratına karşı aktivitesi de ölçüldü ve sırasıyla 3.73 ve 3.75 nmol oksitlenmiş NADPH/dak/mg olarak tespit edildi. İmipramin ve klorpromazinin sığır karaciğer mikrozomal FMO enziminin metimazol oksidasyon aktivitesi üzerine etkileri belirlendi ve çalışılan tüm konsantrasyonların FMO enzim aktivitesini inhibe ettiği bulundu. Sığır karaciğer mikrozomal FMO aktivitesinin modülasyonu üç farklı ağır metal iyonuyla, Ni+2, Cd+2 ve Hg+2, çalışıldı. Herbir ağır metal iyonu için çalışılan diğer tüm konsantrasyonlar ve tüm metimazol konsantrasyonlarında (0.1, 0.2, 0.5, 1.0 mM), FMO enziminin metimazol oksidasyon aktivitesinin kontrole göre azaldığı görüldü. Ni+2, Cd+2 ve Hg+2 iyonları için Ki değerleri sırasıyla 0.5 mM, 0.085 mM, 4.6 uM olarak bulundu. Dixon eğrisinden üç ağır metal iyonu için de inhibisyon çeşidi nonkompetitif olarak gözlendi.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT CHARACTERIZATION AND MODULATION BY DRUGS AND OTHER EFFECTORS OF BOVINE LIVER MICROSOMAL FLAVIN MONOOXYGENASE (FMO) Baser, Deniz Fulya M.S., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Orhan Adah Co-Supervisor: Prof. Dr. Emel Arınç January 2004, 107 pages The flavin-containing monooxygenases (FMO; E.C.I. 14. 13. 8) are microsomal NADPH and oxygen-dependent flavoprotein enzymes that catalyze the oxidation of a wide variety of xenobiotics, including drugs and environmental toxicants. Nucleophiles containing nitrogen, sulfur, phosphorus and selenium heteroatoms are the substrates of FMO. Bovine liver microsomal FMO enzyme activity was characterized using methimazole as substrate, which is a highly specific substrate for FMO. From 12 different bovine liver samples, microsomes were prepared and the average specific activity of bovine liver microsomal FMO was found to be 2.37 ± 0.30 nmol/min/mg (Mean ± SE, n=12). The rate of reaction was linear up to 0.5 mg of bovine liver microsomal protein. The maximum FMO enzyme activity was detected at 37 °C andat pH 8.0. Effects of detergents; Triton X-100 and Emulgen 913, on FMO activity were determined and found that enzyme activity increased by the addition of either detergent at all concentrations (0.1%- 1.0%). The apparent Vmax and Km values of bovine liver microsomal FMO for methimazole substrate were found as 1.23 nmol/min/mg and 0. 1 1 mM, respectively. Thermostability of bovine liver microsomal FMO was studied at four different temperatures; 24 °C, 37 °C, 50 °C and 65 °C. The incubation time required for the complete loss of enzyme activity was 5 minutes at 65 °C, 10 minutes at 50 °C and 6.5 hours at 37 °C. 68 % of the activity was still detectable at the end of 53 hours at 24 °C. Bovine liver microsomal activity towards two drug substrates, imipramine and chlorpromazine, was also determined and found to be 3.73 and 3.75 nmol NADPH oxidized/min/mg, respectively. Effects of two drug substrates, imipramine and chlorpromazine, on bovine liver microsomal FMO-catalyzed methimazole oxidation activity was also studied and found that they inhibit FMO activity at all concentrations studied. Modulation of bovine liver microsomal FMO activity was studied using three different heavy metal ions; Ni+2, Cd+ and Hg+2. At all other concentrations studied for each heavy metal ion and at all substrate methimazole concentrations (0.1, 0.2, 0.5, 1.0 mM), FMO-catalyzed methimazole oxidation activity decreased compared to control activity. Ki values for Ni+2, Cd+2 and Hg+2 were found to be 0.5 mM, 0.085 mM, 4.6 uM, respectively. From the Dixon plot, the pattern of inhibition for three heavy metal ions was observed to be noncompetitive.
Benzer Tezler
- Modifiye edilen EC-ALE (elektrokimyasal atomik tabaka epitaksi) yöntemi ile aynı çözeltiden ZnS'ün sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of compound ZnS thin films from same solution by modified ecale method
İBRAHİM YASİN ERDOĞAN
- Quadrature signal generation in 5-6GHz range using SiGe BICMOS process
5-6GHz aralığında SiGe BICMOS proses kullanılarak 90 derece faz farklı işaret üretimi
PINAR TAŞCI
Yüksek Lisans
İngilizce
2002
Elektrik ve Elektronik Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiElektronik ve Haberleşme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ALİ TOKER
- Fabrication and characterization of GaInP/InGuAs/GuAs modulation doped field effect transistors
GaInP/InGuits/GuAs modüle katkılı alan etkili transistörlerin fabrikasyonu ve karakterizasyonu
TOLGA YALÇIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiElektrik-Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CENGİZ BEŞİKÇİ
- N-İzopropilakrilamid-itakonik asit kopolimerlerinin sentezi ve karakterizasyonu
Başlık çevirisi yok
F.DİLEK AKPINAR
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Kimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiFizikokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CANDAN ERBİL
- ADSL ve geniş bandlı şebekeler
ADSL and broadband networks
MEHMET DURMUŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
Elektrik ve Elektronik Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiElektronik ve Haberleşme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜNSEL DURUSOY