Ökaryotik hücre membranında eksprese edilen alkalen fosfataz aktivitesinin tanımlanması
Identification of alkaline phosphatase activity expressed on eukaryotic cell membrane
- Tez No: 138057
- Danışmanlar: PROF. DR. SİNA GÖKÇE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
6. ÖZET Alkalen fosfatazlar bakterilerden memelilere kadar tüm canlılarda, pek çok dokuda bulunan, tam olarak tanımlanamamış pek çok sieve sahip glikoprotein yapılı bir metalofosfatazlardır. Enzim alkali pH şartlarında çok çeşitli monofosfat esterlerinin hidrolizini katalize edebilir. Bu çalışmada alkalen fosfatazın hücre membranındaki aktivitesinin test edilebilmesi için uygun bir test yöntemi geliştirilmiştir. Geliştirilen bu test hücresel ELISA yöntemine dayalı bir yöntemdir. Bu yöntemde membrana bağlı bulunan alkalen fosfataz aktivitesi para- nitrofenirfosfatın para-nitrofenole dönüşümü ile kolorimetrik olarak incelenmektedir. 250.000 hücrenin kullanıldığı bir testte 1 mg/ml substrat derişimi ile 15 dakikada oda ısısında gerçekleşen bir reaksiyonun ardından enzim aktivitesi ile ilgili informatif sonuçlar elde edilebilir. Geliştirilen bu test sistemi kullanılarak 8 farklı ökaryotik hücre membranındaki enzim aktivitesi incelenmiştir. Çalışma için seçilen bu 8 hücre arasında P3, F0 ve SP2 hücreleri fare kökenli ve myeloma özelliği gösteren, eritrosit ve lenfositler sağlıklı bireylerin periferal kanlarından elde edilmiş, K562 hücreleri farklılaşma yolağından sapmış insan kökenli eritrolösemi özelliği gösteren ve diğer 1G2 ve Okt-10 hücreleri ise monoklonal antikor sentezleyebilen hibrit hücrelerdir. Çalışmada en yüksek aktivite ant'ı-CD38 sentezleme özelliğine sahip hibrit bir hücre olan Okt-10 hücrelerinde elde edilirken en düşük aktivite insan periferal kanından elde edilmiş eritrositlerde görüldü. Myeloma hücreleri ise seçilen tüm hücrelerin arasında yüksek alkalen fosfataz aktivite seviyesine sahip hücrelerdi. K562 hücre membranlarındaki gözlenen aktivite eritrosit membranına bağlı alkalen fosfataz aktivitesinden daha yüksekti. Çalışma sırasında mitojen bir ajan olan frtphemaglutinin (PHA) ile muamele edilerek indüklenen lenfosit hücrelerinin membranlarındaki alkalen fosfataz aktivitesinin 5ug/kuyu konsantrasyonunda^ PHA İle 3 günlük bir indüksiyon sonrasında indüklenmemiş kontrollerle karşılaştırıldığında 3 kat daha yüksek okluğu bulunmuştur. Çalışmada anti-HSA sentezleme özelliğine sahip 1G2 70hücrelerinin antikor sentezi ve membrana bağlı alkaien fosfataz enzim aktivitesinin senim derişimine dayalı değişimi incelenmiştir. Bu incelemeler sonucunda 1G2 hücrelerinde hem antikor hem de alkaien fosfataz aktivitesinin serum derişimi ile pozitif korelasyon gösterdiği bulunmuştur. 71
Özet (Çeviri)
7. ABSTRACT Alkaline phosphatases are ubiquitous enzymes existing in nature in species as different as Escherichia Coli and man, revealing that the enzymes have fundamental but unresolved biological and physiological roles. The enzyme is a glycoprotein acting as a metalophosphatase, which is capable of hydrolyzing a wide variety of monophosphate esters. In this current study, a method which is mainly based on cellular-ELISA is optimized particularly to test the enzymatic activity of membrane bond alkaline phosphatase. In this method, the enzyme activity is measured according to the spectrophotometric analysis of the reaction, in which me enzyme converts para-nitrophenylphosphate (pNPP) to para- nttrophenol, yields a yellow product giving the maxfrnum absorbance at 405nm, by hydrolysis. In an experimental procedure taking place at room temperature 250.000 cells, 1 mg/ml substrate (pNPP) concentration and 20 minute reaction duration can be used to obtain informative results. Membrane bound alkaline phosphatase activities of 8 different eukaryotic cells were measured by using the optimized method. Among 8 selected cell types, SP2, P3 and F0 were originated from mouse, showing myeloma features; erythrocytes and lymphocytes were isolated from peripheral blood obtained from healthy humans; K562 cells were a poorly differentiated member of human erythroleukemic cell lines. The remain in two, 1G2 and Okt-10, were hybridoma cells capable of producing monoclonal antibodies; anti-HSA and anti-CD38 respectively. The highest membrane bound alkaline phosphatase activity was found on Okt-10 cells and the lowest enzyme activfty was measured on erytrocytes. K562 cells were found to be showing higher enzymatic activity when compared to their fully differentiated form, erythrocytes. Lymphocytes, isolated form peripheral blood of healthy individuals, were induced with a mitogenic agent, phytoheamagglutinin (PHA). Celts were incubated with 5ug/wefl PHA concentration for 3 days and the membrane bound enzyme activity of the induced cells were found to show a 3 fold increase when compared 72with the uninduced controls. The effects of differential serum concentration on antibody production and the membrane bound alkaline phosphatase activity were investigated by using 1G2 hybridoma cells. As a result, both antibody production and membrane bound enzyme activity were found to be showing a positive correlation with the serum concentration. 73
Benzer Tezler
- Theileria annulata piroplazma membran proteinlerinde lektin aktivitesinin aranması
Investigation of lectin activity on theileria annulata piroplasm membrane proteins
ÖZGÜR KAYNAR
- İnsan plasental kültür ortamlarında, fibroblast hücre büyümesine etki eden faktörlerin analizi
Başlık çevirisi yok
MELTEM ARIKAN(ÇEVİK)
- The Functions of cycun-ependet kinase inhibitors p16INK4a and p15INK4b in human osteosarcomas
Başlık çevirisi yok
UĞUR AYTAÇ
- İn vitro fertilizasyon sürecinde fare oosit ve embriyolarındaki hücre iskeletinde meydana gelen değişiklikler.
Cytoskeletal changes occurred during in vitro fertilization process in mouse oocytes and embryos.
ERKAN GÜMÜŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
Histoloji ve EmbriyolojiCumhuriyet ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. H. ERAY BULUT
- Ökaryotik transkripsiyon üzerine elektromanyetik alanın etkisi
The Effect of electromagnetic fields on eukaryotic transcription
ÖZLEM EROL
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
BiyolojiÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜNHAN ERDEM
