Sığır midesinden karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve biyoorganik reaksiyonlarda kullanılması
Purified of carbonic anhydrase from bovine stomach and used in bioorganic reactions
- Tez No: 131530
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NAZAN DEMİR, DOÇ. DR. YAŞAR DEMİR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Karbonik anhidraz, sığır midesi, inhibisyon, ester hidrolizi, alkol esterleştirilmesi, Mide, Saflaştırma, Sığırlar, Carbonic anhydrase, bovine stomach, inhibition, hydrolysis of ester, esterification of alcohol. 11, Stomach, Purification, Cattles, Inhibition
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Doktora Tezi SIĞIR MİDESİNDEN KARBONİK ANHİDRAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE BİYOORGANİK REAKSİYONLARDA KULLANILMASI Hayrunnisa NADAROGLU Atatürk Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı Danışman: Doç. Dr. Nazan DEMİR Ortak Danışman: Doç. Dr. Yaşar DEMİR Sığır midesinden karbonik anhidraz enzimi total olarak ve bağlanma şekillerine göre dış periferal, sitozolik, iç periferal ve integral olmak üzere dört basamakta ayrı, ayrı saflaştırıldı ve karakterize edildi. Ayrıca sığır eritrositlerinden karbonik anhidraz enzimi (BCA) saflaştırıldı. Karbonik anhidraz izoenzimlerinin aktivite ölçümleri C02-Hidrataz Aktivitesi ve Esteraz Aktivitesi yöntemleri ile yapıldı. Saflaştırılan mide CA izoenzimlerinin optimum pH ve optimum sıcaklıkları belirlendi. Sığır mide karbonik anhidraz enzimlerinin saflık kontrolü SDS-PAGE ile yapıldı ve izoenzimlerin molekül ağırlıkları jel filtrasyon kromatografısi ile belirlendi. Ayrıca Lineweaver-Burk grafikleri metodu kullanılarak bu CA izoenzimlerinin Vmax ve Km değerleri belirlendi. CA'nın spesifik inhibitörleri olarak bilinen sülfanilamid, KSCN ve NaNa'ün sığır mide CA'ın aktivitesi üzerindeki inhibisyon etkileri incelendi. Kj ve I50 değerleri belirlendi. Saflaştırılan sığır mide karbonik anhidraz ve BCA enzimleri katalizörlüğünde 4- nitrofenil-2,2,2-trifloroasetat, 4-nitrofenil bütirat, fenil benzoat, metil-2-okso-2- fenilasetat, etil-2-fenilasetat, feniletil asetat ve etil benzoat hidroliz edildi. Ayrıca p- kresol alkolü kullanılarak sığır mide karbonik anhidraz ve BCA enzimleri katalizörlüğünde esterleştirme reaksiyonu yapıldı. Esterlerin hidrolizlenmesi ve alkolün esterleşmesi reaksiyonları 10 saat sürdürüldü. Reaksiyonların olup olmadığı, reaksiyon ortamından belirli hacimde ve belirli aralıklarla numune alınarak, organik çözücü ile ekstrakte edildikten sonra UV spektroskopisi, 'H-NMR spektroskopisi ve ince tabaka kromatografısi yardımı ile izlendi. Sığır mide karbonik anhidraz ve BCA izoenzimlerinin esterler ve alkol üzerine farklı tarzda etki ettikleri gözlendi. Bu reaksiyonlardan faydalanılarak karbonik anhidraz enziminin kataliz mekanizması hakkında fikirler geliştirildi. 2003, 139 sayfa
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Ph. D. Thesis PURIFICATION OF CARBONIC ANHYDRASE FROM BOVINE STOMACH AND USE IN BIOORGANIC REACTIONS Hayrunnisa NADARO?LU Atatürk University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Chemistry Supervisor: Assoc. Prof. Nazan DEMİR Coadvisor: Assoc. Prof. Yaşar DEMİR Carbonic anhydrase was separately purified and characterised from bovine stomach as total and in according to bonding forms, as outer peripheral, inner peripheral, cytosolic and integral. Also, carbonic anhydrase was purified from bovine erythrocytes. Activity of carbonic anhydrase isoenzymes was determined by using methods of activity of CO2- Hidratase and activity of esterase. The optimum pH and the optimum temperatures of CA isoenzymes were determined. Purified enzymes were controled with SDS-PAGE and the molecular weight of all enzymes was determined by using gel filtration. Also, Vmax and Km values of purified isoenzymes from bovine stomachwere found by using Linewear-Burk method. Inhibisyon effect of sulphanylamide, KSCN and NaN3 which was known as spesific inhibitors on bovine stomach CA isoenzymes' activity have been investigated in vitro. The values of Kj and I50 were determined. 4-Nitrophenyl-2,2,2-trifloroacetate, 4-nitrophenyIbutirate, phenyl benzoate, methyl-2- oxo-2-phenylacetate, ethyl-2- phenylacetate, phenylethyl acetate and ethyl benzoate were hydrolysed in the catalysis of purified stomach's CA and BCA. Also, the esterification reaction of p-creso\ in catalysis by above isoenzymes were performed. Esters hydrolysis and alcohol esterification reactions were carried out during 10 hours. To be able to determine wheather reactions occur, defined volumes of samples were taken from reaction mixtures at interval times and were extracted by an organic solvent than analyzing on TLC, UV and NMR spectroscopies. It was observed that bovine stomach CA and BCA have a different effects on esters and alcohol. From this results some suggestion can be made about the structure of active domain of CA enzyme. 2003, 139 paper
Benzer Tezler
- Embriyonal sıçan midesinde nöronal nitrik oksit sentaz immünoreaktivitesinin (nNOS-IR) lokalizasyonunun belirlenmesi
Determination of neural nitric oxide synthase immunoreactivity (nNOS-IR) localization in embryonal rat stomach
ZÜBEYDE BAYRAM
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
MorfolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MEVLÜT ASAR
- Atatürk Üniversitesi Tarım İşletmesi koşullarında yetiştirilen esmer sığırlarda laktasyon eğrisi parametrelerinin ve persistensi değerlerinin farklı modellerle incelenmesi
Investigation of lactation curve parameters and persistency values with different models in brown swiss cattle reared under conditions of Atatürk University Farm
SADRETTİN YÜKSEL
- Türkiye'de kırmızı et arz ve talebinin ekonometrik analizi ve kırmızı et sanayi yapısı ile işleyişinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
A. ALİ KOÇ
- Ses yolunun matematik modeli
Başlık çevirisi yok
MEHMET BİLGİNER GÜLMEZOĞLU
Doktora
Türkçe
1992
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiAnadolu ÜniversitesiElektrik-Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ATALAY BARKANA
- A New content adressable memory model utilizing high order neurons
Yüksek dereceli nöronları kullanan yeni bir içerik adreslenebilir bellek modeli
ERHAN ÖZTOP
Yüksek Lisans
İngilizce
1996
Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBilgisayar Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MARİFİ GÜLER