Magnetic affinity sorbents for antibody purification
Antibadi saflaştırılması için magnetik afinite sorbentleri
- Tez No: 131122
- Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: IgG saflaştırılması, m-p(EGDMA-MAH) mikroküreler, Afinite kromatografisi, Magnetik akışkanlaştırılmış yataklar (MSFB) Danışman Prof. Dr. Adil DENİZLİ, Hacette Üniversitesi, Kimya Bölümü, Biyokimya Anabilim Dalı, Adsorpsiyon, Akışkan yatak, Saflaştırma, IgG prifıcation, m-p(EGDMA-MAH) microbeads, Affinity chromatography, Magnetically stabilized fluidized beds (MSFB). Danışman Prof. Dr. Adil DENİZLİ, Hacette University, Department of Chemistry, Biochemistry Division, Adsorption, Fluidized bed, Purification
- Yıl: 2003
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ANTİBADİ SAFLAŞTIRILMASI İÇİN MAGNETİK AFİNİTE SORBENTLERİ Sinan AKGÖL ÖZ Bu çalışmada insan plazmasından etkin bir şekilde immunoglobulin G saflaştırılması amacıyla yeni bir yaklaşım geliştirilmiştir. Pseudospesifik ligand metakroilamidohistidin (MAH), metakroil klorür ve histidin kullanılarak sentezlenmiştir. Polimerik yapıya manyetik özellik kazandırmak için Fe304 kullanılmış ve m-poli(EGDMA-MAH) mikroküreler süspansiyon polimerizasyonu ile (150-250 um çapında) elde edilmiştir. Spesifik yüzey alanı 80.1 m2/'dır. MAH, FTIR ve NMR ile karakterize edilmiştir. m-poly(EGDMA-MAH) şişme deneyleri, FTIR, DSC ve elementel analiz yöntemleri ile karakterize edilmiştir. Polimerik yapıdaki magnetitlerin varlığı ESR ile belirlenmiştir, g faktörü 2.56 olarak hesaplanmıştır. Mikroküreler in-vitro koşullarda kan ile etkileştirilmiş ve pıhtılaşma zamanları belirlenmiştir ve kan ile uyuşabilirliklerinin iyi olduğu görülmüştür. Şişme oranı %40.2 olan ve 70.32 umol MAH/g oranında MAH içeren m-poly(EGDMA-MAH) mikroküreler, hem kesikli hem de manyetik olarak akışkanlaştırılmış yatak sisteminde (MSFB) sulu çözeltilerden ve insan plazmasından HlgG adsorpsiyon çalışmalarında kullanılmıştır. HlgG adsorpsiyonunun kullanılan tampon sistemine bağlı olduğu gözlenmiştir. MOPS'da HlgG 'nin sulu çözeltilerden adsorpsiyon kapasitesi diğer tampon sistemlerine göre yüksek olduğu bulunmuştur. MSFB deneylerinde de sulu çözeltilerde aynı tamponlar kullanılarak çalışmalar gerçekleştirilmiştir. Maksimum adsorpsiyon kapasitesi, MOPS için 244.0 mg/g, 'dır. Kesikli ve MSFB sisteminde, insan plazmasından çok daha yüksek oranlarda HlgG adsorpsiyonu gözlenmiştir (81.1 mg/g ve 304.7 mg/g). Diğer kan proteinlerinin adsorpsiyon kapasiteleri fibrinojen için 4.0 mg/g ve albumin için 8.0 mg/'dır. Toplam protein adsorpsiyonu 94.7 mg/g olarak belirlenmiştir. Geliştirilen bu afinite mikroküreleri insan plazmasından HlgG 'nin tek adımda ayrılmasını sağlamıştır. Adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir azalma olmaksızın manyetik mikrokürelerin tekrar tekrar kullanılabileceği gözlenmiştir.
Özet (Çeviri)
MAGNETIC AFFINITY SORBENTS FOR ANTIBODY PURIFICATION Sinan Akgol ABSTRACT In this study a novel and new approach was developed to obtain an efficient separation of HlgG from human plasma. Methacryloyl amidohistidine (MAH) was chosen as a ligand and synthesized by using methacryloylchloride and histidine. Spherical microbeads with an average size of 150-250 urn were obtained by the radical suspension polymerization of MAH and EGDMA conducted in an aqueous dispersion medium in the presence of Fe304. m-poly(EGDMA-MAH) micro-beads had a specific surface area of 80.1 m^/g. Synthesized MAH monomer was characterized by FTIR and NMR. m-poly(EGDMA-MAH) beads were characterized by swelling studies, FTIR, DSC and elemental analysis. The presence of magnetite particles in the polymeric structure was confirmed by electron spin resonance (ESR). g factor was found as 2.56 for m-poly-(EGDMA-MAH) structure. The m-poly(EGDMA) and m-poly(EGDMA-MAH) microbeads were contacted with blood in in-vitro systems. The clotting times were also followed and good blood compatibility properties of both m-poly(EGDMA) and m-poly(EGDMA-MAH) were clearly observed. These m-poly(EGDMA-MAH) microbeads with a swelling ratio of 40.2%, and containing 70.32 MAH/g were used in the adsorption/desorp-tion of HlgG from aqueous solutions and human plasma in batch and magnetically stabilized fluidized bed system (MSFB). HlgG adsorption onto m-poly(EGDMA- MAH) microbeads seemed to depend on the buffer system used. In MOPS buffer, adsorption capacity of HlgG (40.2 mg/g) from aqueous solutions is higher than in the other buffer systems. In MSFB experiments, adsorption studies were also carried out using the same buffers in aqueous solutions. Maximum adsorption capacities are observed at pH 6.5 for MOPS (244.0 mg/g) in aqueous solutions. Much higher amounts of HlgG were adsorbed from human plasma in batch and MSFB systems (up to 81.1 mg/g, and 304.7 mg/g, respectively). Adsorption capacities of other blood proteins were obtained as 4.0 mg/g for fibrinogen and 8.0 mg/g for albumin. The total protein adsorption was determined as 94.7 mg/g. The affinity microbeads allowed the one-step separation of HlgG from human plasma.IV It was observed that HlgG could be repeatedly adsorbed and desorbed with m- poly(EGDMA-MAH) microbeads without significant loss in the adsorption capacity.
Benzer Tezler
- Sitokrom C adsorbsiyonu için manyetik metal şelat afinite sorbentlerin hazırlanması
Preparing of magnetic metal-chelat affinity sorbents for adsorption of cytochrome C
BİRNUR AKKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
KimyaCumhuriyet ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. FERDA CANDAN
PROF.DR. ADİL DENİZLİ
- Preparation of immobilized metal affinity sorbents
İmmobilize metal afinite sorbentlerinin hazırlanması
MÜFRETTİN SARI
- Hidroksil fonksiyonlu, manyetik olan veya olmayan mikroparçacıkların çözücü buharlaştırma yöntemi ile hazırlanması, bunların protein bağlama kinetiğinin incelenmesi ve dolgulu kolonlardaki kinetik özelliklerinin tespiti amacıyla yeni bir teknik geliştirilmesi
Başlık çevirisi yok
DENİZ TANYOLAÇ
Doktora
Türkçe
1994
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET R. ÖZDURAL
- Plazmit DNA saflaştırılması işleminde kullanılmak üzere magnetik afinite mikrokürelerin hazırlanması
The preparation of the magnetic affinity microbeads for the purification of the plasmid DNA
MERAL ÜRÜN
Yüksek Lisans
Türkçe
2006
BiyokimyaKırıkkale ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
PROF.DR. MEHMET YAKUP ARICA
- Micronsize magnetic beads for lysozyme purification
Lizozim saflaştırılması için mikron boyutlu manyetik partiküller
EVRİM BANU ALTINTAŞ
