Isolation and characterization of an adhesin protein from the surface of a respiratory pathogen Moraxella catarrhalis
Moraxella catarrhalis bakterisinin yüzeyinden bir adhesin proteininin izole edilmesi ve karakterizasyonu
- Tez No: 129349
- Danışmanlar: DOÇ. DR. KAMRUDDİN AHMED
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Moraxella catarrhalis, bağlanma, bağlanma inhibisyon deneyi, adhesin. ' &&&****, Bakteriler, Moraxella branhamella catarrhalis, Yapışma, Moraxella catarrhalis, adherence, attachment inhibition asssay, adhesin. IV, Bacteria, Moraxella branhamella catarrhalis, Adhesion
- Yıl: 2002
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET MORAXELLA CATARRHAUS BAKTERİSİNİN YÜZEYİNDEN BİR ADHESİN PROTEİNİNİN İZOLE EDİLMESİ VE KARAKTERİZASYONU TOLGA TURAN Moleküler Biyoloji ve Genetik Yüksek Lisans Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Kamruddin Ahmed Ağustos 2002, 59 sayfa İnsan boğaz florasının bir üyesi olan Moraxella catarrhalis, 80'li yılların başından itibaren bir patojen olarak önem kazanmaya başlamıştır. M. catarrhalis çocuklarda orta kulak iltahabı ve yetişkinlerde (özellikle kronik bronşit hastalarında) alt solunum yolu enfeksiyonunda en çok karşılaşılan üçüncü bakteridir. Antibiyotik dirençli suşların son zamanlarda çok artması (bir çok yerde 100%) ve bu bakteriye karşı başardı bir aşı geliştirilememiş olması, M. catarrhalis üzerine yapılan çalışmaları arttırmıştır. Bu çalışmada molekül ağırlığı 55 kDa olan bir protein M. catarrhalis' m yüzeyinden celite kromatografisi metoduyla izole edilmiştir. Bu proteinin ısı dirençli olduğu ve 2-merkaptoethanol ve DTT tarafından etkilenmediği bulunmuştur. Proteinin immunojenik olduğu tavşan ve insanda yapılan deneyler sonucu ispatlanmıştır. Buna ek olarak proteinin amino kısmından 40 amino asitlik bölümü Edman metoduyla belirlenmiştir. Proteinin bakteride adhsin olarak görev yaptığı bağlanma inhibisyonu deneyleriyle gösterilmiştir. Bu deneylerde 55 kDa proteininin insan boğaz epitel hücreleriyle inkübe edilmesi M. catarrhalis'' m boğaz hücrelere bağlanmasını azaltmıştır. Benzer mantıkla bu proteine karşı üretilmiş monoklonal antikorun M. catarrhalis ile inkübe edilmesi bakterinin hücrelere bağlanmasını azaltmıştır. Bu proteinin boğaz epitel hücrelerine bağlandığı immunofloresans metodu ile de gösterilmiştir. 55 kDa proteini kodlayan genin klonlanması için protein sekansından elde edilen dejenere primerlerle PCR yapılmıştır. Sonuç olarak 500 bazlık bir fragman elde edilmiştir ama bu fragmanın amino asit zinciriyle homolog olmadığı görülmüştür. Buna ek olarak M. catarrhalis genomundan hazırlanan gen kütüphanesi monoklonal antikor ve radyoaktif işaretli bir oligonukleotid ile taranmıştır. Çıkan pozitif kolonilerin sekanslanması sonucu elde edilen bilgiler amino asit zinciriyle karşılaştırılmış fakat homoloji bulunamamıştır. Elde edilen pozitif klonlar sonuna kadar henüz sekanslanmamıştır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF AN ADHESIN PROTEIN FROM THE SURFACE OF A RESPIRATORY PATHOGEN MORAXELLA CATARRHALIS TOLGA TURAN M. S in Molecular Biology and Genetics Supervisor: Assoc. Prof. Kamruddin Ahmed August 2002, 59 pages Moraxella catarrhalis is a member of the normal flora of upper respiratory tract. Starting in the early 1980s it gained importance as an important cause of otitis media in children and lower respiratory tract infections in adults with chronic obstructive pulmonary disease. P-lactamase producing strains of M. catarrhalis has been increasing at a very fast rate. In some locations, 100% of the strains are (5- lactamase producer. The pathogenesis of infection by this bacterium is not clearly understood which hindered the development of a vaccine. In this study, a surface protein of about 55 kDa was isolated from M. catarrhalis by celite chromatography. It is a heat stable protein and is not affected by 2-mercaptoethanol or dithiothreitol treatment. The immunogenic property of the protein has been determined by immunizing rabbits with M. catarrhalis and detecting the antibody response in serum against 55 kDa protein by Western blotting. In addition, the protein is immunogenic in humans as antibody against 55 kDa protein can be detected in the sputum of patients with M. catarrhalis infection. Moreover, we determined upto 40 amino acids at the Af-terminal and also two fragments of the protein. To determine the function of the protein, attachment inhibition assays were performed and it was found that 55 kDa protein competetively inhibits attachment of M. catarrhalis to human pharyngeal epithelial cells (HPEC). Similarly, monoclonal antibody against 55 kDa (mAb) blocks the protein and inhibits the attachment of M. catarrhalis to HPEC. These two lines of evidence show that 55 kDa protein is an adhesin of M. catarrhalis which mediate attachment to HPEC. In addition, immunoflourescence experiments further verified that 55 kDa protein binds to HPEC. To sequence the gene encoding 55 kDa protein, PCR was done using degenerate primers constructed from the N~ terminal amino acid sequence. PCR amplification of the possible gene of 55 kDa protein resulted in a 500 bp fragment, but no homology can be obtained with N- terminal amino acid sequence. In addition, a genomic library of M. catarrhalis is prepared and screened with mAb and with a radiolabelled oligonucleotide probe. We isolated several positive clones; therefore in future it might be possible to sequence the gene encoding 55 kDa protein from these clones.
Benzer Tezler
- Tükürük müsinleri MG1 ve MG2'nin izolasyonu ve müsin-bağlanan oral streptococ adezinlerinin tespiti ve tanımlanması
The Identification and characterization of salivary mucin-binding adhesins from oral streptococci
MEHMET KESİMER
- TiAIN, TİN tek ve çok katlı kaplamaların karakterizasyonu
Başlık çevirisi yok
OĞUZ ÇINAR
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Metalurji Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiMetalurji Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ FUAT ÇAKIR
- Azo bağı içeren politetrahidrofuran sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of azo-linked polytetrahydrofuran
GÜRKAN HIZAL
- Rhodobacter capsulatus bakterisinde sitokrom c oksidaz mutantlarının eldesi ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of cytochrome c oxidase mutants from rhodobacter capsulatus
SEMRA AYGÜN
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
BiyolojiBalıkesir ÜniversitesiBiyoloji Eğitimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLENDAM TÜMEN
- Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520'de δ-aminolevulinik asit dehidrataz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu
Isolation and biochemical characterization of δ-aminolevulinic acid dehydratase from Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520
ŞENGÜL AKSAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2006
BiyolojiAfyon Kocatepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MUHSİN KONUK