Geçici fokal serebral iskemi sonrası alfa-sinüklein ve ubikütin proteinlerinin incelenmesi
Brief focal cerebral ischemia induces alpha-synuclein aggregates in the mouse brain
- Tez No: 111935
- Danışmanlar: PROF. DR. TURGAY DALKARA
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Nöroloji, Neurology
- Anahtar Kelimeler: Fokal serebral iskemi, alfa-sinüklein, oligomerizasyon, agregasyon, ditirozin, HSP70, ubikütin, Western blotting, immünohistokimya, Focal cerebral ischemia, alpha-synuclein, aggregation, oligomerization, dityrosine, HSP70, ubiquitin, Western blotting
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Nörobilim Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Temel Nörolojik Bilimler Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Ünal Çevik I., Geçici fokal serebral iskemi sonrası alfa-sinfiklein ve ubikütin proteinlerinin incelenmesi, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Temel Nörolojik Bilimler (Neuroscience) Programı Doktora Tezi, Ankara, 2002. Anormal protein-protein etkileşimi sonrası oluşan fîlamentöz agregatların pek çok nörodejeneratif hastalıkta nöron veya gliaların disfonksiyon ve ölümünde rol oynadığına dair veriler mevcuttur. Alfa-sinüklein proteininin düşük pH, oksidatif ve nitrozatif strese maruz bırakıldığında yüksek molekül ağırlıklı oligomerler, fibriller ve agregatlar oluşturduğu gösterilmiştir. İskemik beyinde oksidatif ve nitrozatif stres ile pH düşüklüğü mevcuttur, İskemiye bağlı a-sinüklein agregasyonu in vivo ortamda daha önce araştırılmamıştır. Bu çalışmada kısa süreli geçici orta serebral iskemisinin a-sinüklein agregasyonuna yol açıp açmadığım araştırdık. Bu amaçla farelere 30 dakika iskemi ve 6 saat, 24 saat, 72 saat ve 7 gün süreyle reperfüzyon uyguladık. İmmünohistokimyasal çalışmalarda reperfüzyon süresi arttıkça iskemik hemisferde a- sinüklein agregat-benzeri perinükleer yerleşimli kümeleşmelerin arttığını gözledik. Western blotting ile 30 dakika orta serebral iskemisi ve 72 saat reperfüzyon sonrası deterjanda-çözünmeyen a-sinüklein agregatlarını oluştuğunu saptadık. Amiloidojenik özelliği olmayan beta-sinüklein proteinin ise iskemi sonrası perinükleer bölgede kümeleşerek biriktiğini ancak deterjanda-çözünmeyen agregatlar oluşturmadığım gözledik. Ditirozin kovalent bağlan molekülün oksidatif strese maruz kaldığının bir işaretidir. İskemi sonrası oluşan a-sinüklein agregat-benzeri kümeleşmelerin ditirozin sinyali ile kolokalize olması, a-sinüklein proteinindeki oksidatif modifikasyonlar ve agregasyon ile ilişkili olabilir. Alfa-sinüklein agregat-benzeri kümeleşmeleri, Lewy cisimciklerinde olduğu gibi, ubikütin ve ısı şoku proteini 70 (HSP70) ile de birliktelik gösteriyordu. Fakat bu bulguyu doğrulamak için ditirozin, ubikütin ve HSP70'in a-sinüklein agregat-benzeri kümeleşmelerle birlikteliğini Western blotting analizi ile de doğrulanması gerektiğini düşünüyoruz. Sonuç olarak kısa süreli fokal serebral iskeminin a-sinüklein yapışım bozarak deterjanlara dayanıklı çözünmeyen agregatlar oluşturduğunu göstermiş olduk. Bu çalışma normal a-sinüklein ekspresyonu gösteren fare beyninde patolojik koşullarda a-sinüklein agregasyonunun oluşabileceğini gösteren ilk araştırmadır. Bu bulgular vasküler demansın patogenezinde, gelip geçici iskemik atakların protein agregatları oluşturarak rol oynayabileceğini düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Ünal Çevik I., Brief focal cerebral ischemia induces alpha-synuclein aggregates in the mouse brain, Hacettepe University Health Sciences Institute PhD Thesis in Neuroscience, Ankara, 2002. Increasing evidence suggests that filamentous aggregates resulting from abnormal protein- protein interactions play a mechanistic role in dysfunction and death of neurons or glia in many neurodegenerative diseases. Alpha-synuclein protein has been shown to form high molecular weight oligomers as well as aggregates and fibrils under oxidative/nitrozative stress and low pH. Ischemia causes oxidative/nitrozative stress and low pH. Possible a-synuclein aggregation induced by ischemia has not been previously investigated in vivo. In this study we have investigated the conformational changes in a-synuclein protein in mice subjected to transient focal cerebral ischemia and searched whether transient oxidative processes induce a-synuclein aggregation in vivo. For this purpose, we have subjected mice to 30 minutes of ischemia and 6 hours, 24 hours, 72 hours and 7 days of reperfusion. In immunohistochemical studies, we observed perinuclear aggregate-like a-synuclein accumulations, which increased in parallel with time after reperfusion. In Western blotting, we detected detergent-insoluble a-synuclein aggregates after 30 minutes of middle cerebral ischemia and 72 hours of reperfusion. Non-amyloidogenic beta-synuclein protein showed perinuclear accumulation, however, did not produce detergent-insoluble aggregates after ischemia. Dityrosine covalent links is a marker of oxidative stress. Colocalization of dityrosine signal with a-synuclein aggregate-like accumulations may be related to oxidative modifications in a-synuclein protein and aggregation. Alpha-synuclein aggregate-like accumulations colocalized with ubiquitin and heat shock protein 70 (HSP70) as in Lewy bodies. However, colocalization of a-synuclein aggregate-like accumulations with dityrosine, ubiquitin and HSP70 needs to be verified by Western blotting. In conclusion, we have demonstrated that, brief focal cerebral ischemia induces the formation of detergent-insoluble a- synuclein aggregates. This is the first study showing that pathological processes may induce a- synuclein aggregation in the wild-type mouse brain expressing normal a-synuclein. These data suggest that transient ischemic attacks may play role in pathogenesis of vascular dementia by causing protein aggregation.
Benzer Tezler
- Deneysel geçici fokal serebral iskemide kan-beyin bariyeri bozukluğunun zamansal seyri
Başlık çevirisi yok
AYSUN DURUKAN
- Seçici nöronal nekroz için yeni bir geçici fokal serebral iskemi metodu geliştirilmesi
Başlık çevirisi yok
ETHEM MURAT ARSAVA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2005
NörolojiHacettepe ÜniversitesiNöroloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. TURGAY DALKARA
- İskeminin erken döneminde yer alan moleküler mekanizmalar
Early molecular mechanisms in cerebral ischemia
MÜNİRE KILINÇ
- İskemik penumbrada kalıcı sinaptik transmisyon bozukluğunun altında yatan presinaptik mekanizmaların incelenmesi
Investigation of presynaptic machanisms underlying failure of synaptic transmission in ischemic penumbra
HAYRUNNİSA BOLAY BELEN
- Deneysel intermittant serebral iskemi ve reperfüzyon ile E vitamininin enfarkt hacmi üzerine olan etkileri
The Effect of experimental intermittent cerebral ischemia and reperfusion with vitamin E to the enfarct volume
O. MELİH İZDEŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1999
NöroşirürjiGazi ÜniversitesiNöroşirürji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYDIN PAŞAOĞLU