Alfa-D- galaktosidaz enziminin izolasyonu ve karakterizasyonu
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 10287
- Danışmanlar: PROF. DR. AZMİ TELEFONCU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Enzimler, Galaktosidazlar, Lactobacillus, Şeker endüstrisi, Enzymes, Galactosidases, Lactobacillus, Sugar industry
- Yıl: 1990
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Çeşitli organizmaların << -D-galaktosidaz enzimi içerdiği uzun yıllardan beri bilinmektedir. c< -D-galaktosidaz enzimi, son yıllarda özellikle şeker endüstrisi için kullanılması düşünülen bir enzimdir. Bu sebeple OC -D-galaktosidazin uygun bir kaynaktan ekonomik bir biçimde izolasyon ve saflaştırılması büyük bir önem tanımaktadır. Bu çalınmada Laktobaci1lus brevis mikroorganizmalarından OC -D-galaktosidaz izole edildi ve elde edilen preparatın karakterizasyonu üzerinde çalışıldı. Çeşitli izolasyon ve saflaştırma tekniklerinin incelenmesi, optimum pH ve optimum tem- peratür tesbiti ve safsızlık yaratan unsurların uzaklaştırılması gibi bir seri çalışma yapıldı. Söz konusu çalınmalardan elde edilen verilerin değerlendirilmesiyle yüksek aktiviteye sahip çözünür oC -D-galaktosidaz preparatı elde edilmiştir, öncelikle fermantasyon süresi, ası oranı ve ortamın seker içeriğinin tesbiti üzerinde duruldu. Yapılan çalışmalar sonucunda melas içeren ortamda % 2 ası oranı ile Eh saatlik fermantasyon sonucu en yüksek aktivite elde edildi. Büyük çaplı fermantasyon yukarıdaki sonuçlara göre yapıldı. Fermantas yon sonunda hücreler 3000 g'de 15 dakika santr ifüjlenerek ayrıldı ve % 0,85 lik tuz çözeltisi ile yıkandı. Daha sonra Sû dakika sonikasyona maruz bırakılarak hücreler parçalandı. Bu hücre kalıntıları 1S000 g'de 25 dakika santr if üj lenerek ayrıldı. Bu işlemden sonra Extrat V. 70 lik doygun <1MH ) SO ile <+ 2 t* çöktürüldü ve saf suya karsı diyaliz lendi. Takibeden işlemde, çözeltideki proteinlerin uzaklaştırılması amacıyla DEAE-Sephadex kolonundan (2,2x13 cm) yararlanıldı. Kolon 0,01 M-0,025 M--41- 0,05 M-0,1 M pH:7 olan fosfat tamponu ile protein absorbansı gözlenmeyinceye kadar yıkandı. Bu absorbanlar 280 nm ' de ölçüldü. Sonuçta üç ayrı protein fraksiyonunun varlığı tesbit edildi. En yüksek enüimatik aktiviteye sahip fraksiyon suya karşı diyalizlendi. Bu işlemlerin sonunda çözünür &?* -D-galak tosidaz elde edildi. SDS muamelesi ile kağıt elektroforezi uygulandı. Bu işlem sonucu proteinin alt birim içermediği ve iki fraksiyonun elek troforetik mobilite değerlerininde birbirine yakın olduğu o gözlendi. Optimum pH 5.5-6.0 aralısında (37 O optimum temperatürde 35-4-0 C aralısında (pH:5,8) bulunmuş olup sonuçlar literatürdeki verilere uyumludur.
Özet (Çeviri)
-42- SUMMARY It has been known for a long time that microorganisms contain ç>(. -D-galactos idase. C\ -D-galactosidase enzyme is a fundamental material for sugar industry during recent years. Because of this reason it is very important that the isolation and purification of 0\ -D-galakc tosidase economically from an appropriate resource. In this study, 0\ -D-galactosidase was isolated from Lactobac i 1 lus brevis and then we have worked on the characte rization of this obtained preparation. A series of experiments were carred out such as;the examination of different isolation and purification techniques, determination of optimum pH and temperature and the removal of impurities. As an evaluation of the data of the above mentioned experiments, a highly active soluble C\ -D-galactosidase preparation was obtained. The fer- mantation time, propertion of inoculation and the Content of Sugar in the medium was studied primarily and it was Found that the medium, that contains molasses with a propertion of 2 '/. inculation, at 3*t hours fermantation time has the highest enzymatic activity. At the end of the fermantation, microorga nisms were removed by centr i f ugat ion at 3OO0 g for 15 minutes and were washed with 0,85 V, salt solution. Then the cells were sonicated and the resudues of cells were removed by centrifugate were precipitated at 70 '/. ammonium Sulfate satu ration and this precipitate was dialized against water. As subsequent treatment a DEAE-Sephadex Column <2,Sxl3 cm) was used with the purpose of removal of proteins, and the column-4-3- was washed with 0,01 M, 0,025 M, 0,05 M and 0,1 M (pH:7) phosphate buffers until the protein absorbance disappeared. These absorbances were measured at HSO nm, thus the presence of three different protein fractions was determined. The frac tion with the highest enzymatic activity was dialyzed against distilled water. At the end of these processes, soluble Cİ -D- galactosidase preparation was obtained. Paper elec tropheresis was performed by using SDS, and no it was observed that the protein hadn't any subunits. Optimum o pH was found te bo 5.5-6.0 at (37 C) and optimum temperature was determined as 35-^0 C (pH:5.8) These data confirm with the 1 i terature.
Benzer Tezler
- Karpuz (citrullus vulgaris) alfa-galaktozidazının doğal ve sentetik polimerlerde immobilizasyonu
Immobilization of watermelon (citrullus vulgaris) alfa-galactosidase on natural and synthetic polymers
SEÇİL TATAR ÖNAL
- Bacillus stearothermophilus var. Calidolactis C953 tan a-galaktosidaz üretimi ile ilgili bir araştırma
Başlık çevirisi yok
E.ESİN HAMEŞ
- Aspergillus Flavipes'in indüklenebilen alfa-galaktozidaz izoenzimleri
Induced alpha-galactosidase isoenzymes of aspergillus flavipes
NURTEN ÖZSOY
- Midye (Mytilus galloprovincialis L.) hepatopankrası Alfa-D-Galaktozidaz`ının araştırılması
Studies on mollusc hepatopancreas Alfa-D-Galactosidase
S. BANU OKKAOĞLU
- 1-Alfa-D- glükopiranoz-2-beta-fruktofuranosidin kristal yapısının X-ışınları difraksiyon yöntemi ile araştırılması
Başlık çevirisi yok
SEMA ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
1991
Fizik ve Fizik MühendisliğiErciyes ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. MEHMET AKKURT