İskelet kas hücrelerinde Desmin'in MyoD ve Myogenin proteinlerinin kararlılığı üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of Desmin on the protein stability of MyoD and Myogenin in skeletal muscle cells
- Tez No: 1010147
- Danışmanlar: PROF. DR. PERVİN RUKİYE DİNÇER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Desmin, Kas distrofileri, Moleküler biyoloji, Desmin, Muscular dystrophies, Molecular biology
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu yüksek lisans tezinde, Desmin'in iskelet kası hücrelerinde MyoD ve Myogenin proteinlerinin proteolitik yıkım hızı üzerindeki etkisi araştırılmıştır. Desmin, tip III ara filament proteini olup kas dokularında yapısal bütünlüğün korunmasında görev alır. Bununla birlikte, miyogenez sırasında erken dönemde ifade edilmesi, farklılaşma sürecinde düzeyinin artması ve çekirdek taşınım sinyalleri içermesi, düzenleyici işlevlere de sahip olabileceğini düşündürmektedir. Zebra balığı ve fare modellerinde yapılan çalışmalar, Desmin'in mRNA ve ribozomlarla ilişkili olabileceğini ve transkripsiyon sonrası düzenlemede rol alabileceğini göstermiştir. Ayrıca, DES baskılanmasının MYOD ve MYOG mRNA düzeylerini azalttığı bildirilmiş olsa da bu etkinin protein yıkım hızına yansıyıp yansımadığı henüz test edilmemiştir. Bu tez çalışmasında, ölümsüzleştirilmiş insan iskelet miyoblast hücre hattında (LHCN-M2) farklılaşma sürecinin erken döneminde (0–120 saat) MyoD, Myogenin ve Desmin protein düzeyleri incelenmiştir. Bulgular, Desmin'in miyotüplerde arttığını, MyoD'nin zamanla azaldığını ve Myogenin'in farklılaşma ile birlikte arttığını ortaya koymuştur. Desmin baskılanması için siRNA transfeksiyonu optimize edilmiş ve protein düzeyinde anlamlı azalma elde edilmiştir (p < 0,01). Protein yıkım hızının değerlendirilmesinde siklohekzimid chase analizi kullanılmış; MyoD için 200 µg/mL (4 saat) ve Myogenin için 150 µg/mL (2 saat) koşulları belirlenmiştir. siRNA ve siklohekzimit kombinasyonunun uygulandığı deneylerde Desmin baskılanması başarıyla doğrulanmıştır (MyoD grubu için p < 0,001; Myogenin grubu için p < 0,01). Sonuç olarak, mevcut deneysel koşullar ve örneklem büyüklüğü altında Desmin baskılanmasının MyoD ve Myogenin proteolitik yıkım hızları üzerinde istatistiksel olarak anlamlı bir etkisi gösterilememiştir (MyoD: p = 0,7137; Myogenin: p > 0,99). Bu bulgular, sınırlı biyolojik tekrar sayısı göz önünde bulundurulduğunda, Desmin'in söz konusu miyojenik faktörlerin proteolitik yıkım hızları üzerindeki olası etkisini kesin olarak dışlamamakta; ancak bu etkinin varsa protein yıkımından ziyade mRNA kararlılığı veya translasyon düzeyinde işleyebileceğine işaret etmektedir.
Özet (Çeviri)
In this master's thesis, the effect of Desmin on the proteolytic degradation rate of MyoD and Myogenin in skeletal muscle cells was investigated. Desmin is a type III intermediate filament protein that plays a role in maintaining structural integrity in muscle tissues. However, its early expression during myogenesis, its increased levels upon differentiation, and the presence of nuclear transport signals suggest that it may also possess regulatory functions. Studies conducted in zebrafish and mouse models have indicated that Desmin may be associated with mRNA and ribosomes and may play a role in post-transcriptional regulation. Furthermore, although DES knockdown has been reported to reduce MYOD and MYOG mRNA levels, whether this effect is reflected in protein degradation rate has not yet been tested. In this study, MyoD, Myogenin, and Desmin protein levels were examined during the early-stage differentiation process (0–120 hours) in an immortalized human skeletal muscle myoblasts cell line (LHCN-M2). The results showed that Desmin increased in myotubes, MyoD decreased over time, and Myogenin increased with differentiation. siRNA transfection was optimized to suppress Desmin expression, and a statistically significant reduction in protein levels was achieved (p < 0.01). Cycloheximide chase analysis was used to assess protein degradation rate, with optimized conditions of 200 µg/mL (4 hours) for MyoD and 150 µg/mL (2 hours) for Myogenin. In experiments combining siRNA and cycloheximide, Desmin knockdown was successfully confirmed in both the MyoD group (p < 0.001) and the Myogenin group (p < 0.01). However, despite Desmin knockdown, no statistically significant change was observed in the proteolytic degradation rates of MyoD (p = 0.7137) or Myogenin (p > 0.99). These findings indicate that, under the experimental conditions and sample sizes used in this study, a statistically significant effect of Desmin knockdown on the proteolytic degradation rate of MyoD and Myogenin could not be demonstrated. Given the limited number of biological replicates, these results do not conclusively exclude a potential role for Desmin in regulating the stability of these myogenic factors but suggest that any such effect may operate at the level of mRNA stability or translation rather than proteolytic degradation.
Benzer Tezler
- Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
NİLÜFER DÜZ
Doktora
Türkçe
2024
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PERVİN RUKİYE DİNÇER
- Fonksiyonel doku mühendisliği yöntemi ile iskelet kası geliştirilmesinde yağ kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin kullanılması
Use of adipose derived mesenchymal stem cells in functional skeletal muscle tissue engineering
EMRE ERGENE
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. PINAR HURİ
- Fare miyoblast hücre hattında KLF5 geninin farklılaşma sürecine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of KLF5 gene on differentiation in mouse myoblast cell line
UĞUR AKPULAT
Doktora
Türkçe
2014
Moleküler TıpHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YUSUF ÇETİN KOCAEFE
- İnsan miyoblast ve mezenkimal kök hücre yüklenmiş aselüler çizgili kas kaynaklı doğal ve yarı-yapay iskelelerin çizgili kas dokusu oluşturma potansiyeli
Skeletal muscle tissue formation potential of asellular skeletal muscle originated native and semi-syntetic scaffolds loaded with human myoblasts and mesenchymal stem cells
BİROL AY
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
GenetikKocaeli ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. HALİME KENAR
- In vitro skeletal muscle model development through co-culture of cells
İn vitro iskelet kas modelinin ortak-kültür aracılığıyla geliştirilmesi
AYŞE BURCU ERTAN
Doktora
İngilizce
2017
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. FATMA NEŞE KÖK
PROF. DR. GAMZE KÖSE